基于超声预处理的大米降血压多肽的制备及其功能评价

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1、第10卷第6期中国食品学报Vol．10No．62010年12月JournalofChineseInstituteofFoodScienceandTechnologyDec．2010基于超声预处理的大米降血压多肽的制备及其功能评价1，21113马海乐郝志伟何荣海刘斌ZhongliPan（1江苏大学食品与生物工程学院江苏镇江2120132江苏省农产品生物加工与分离工程技术研究中心江苏镇江2120133USDA-ARSWestRegionalResearchCenter，ProcessedFoodsResearchUnit，California94710，

2、USA）摘要采用酶法制备大米降血压肽。本文研究大米降血压肽制备中底物蛋白的超声预处理、酶解产物的超滤提取纯化、大米降血压肽的抗消化道酶降解及原发性高血压大鼠（SHR）一次性灌胃试验等。试验结果表明，最优超声预处理的参数为每升处理液施加超声功率250W、超声时间10min、工作间歇比1∶2、循环转速30r/s。经过超声预处理，酶解产物对ACE的抑制率由未经超声预处理的69.8%提高到92.8%。5kDa为最佳的超滤提取纯化截流分子质量。经过超滤，滤液的IC50值随大米多肽分子质量的降低而降至1.71mg/mL。大米降血压多肽具有良好的抗消化道酶降解能力

3、，对SHR大鼠具有明显的降血压效果。关键词大米蛋白；降血压肽；超声预处理；超滤；动物实验文章编号1009-7848（2010）06-0036-05大米蛋白是大米淀粉生产的副产品，也可以开发利用提供研究基础。从米糠和碎米中直接提取。每年我国稻谷产量在1.85亿t以上，约占世界稻谷总产量36%，大米蛋1材料与方法白资源极其丰富。对大米蛋白的精深加工与利用，1.1材料与设备一直是大米产业亟待解决的难题。1.1.1材料大米蛋白，购自嘉吉饲料镇江有限[1]大米蛋白中含有大量的疏水性氨基酸，一般公司；碱性蛋白酶（酶活40万单位/g），购自无锡认为Trp、Tyr、

4、Phe和Pro在肽链的羧基端以及肽雪梅酶制剂有限公司；N-（3-（2-FURYL）ACRY-链氨基端含有支链脂肪族氨基酸时，多肽降血压LOYL）-PHE-GLY-GLY（FAPGG）、4-羟乙基哌嗪[2-4]活性较好。近年来一些研究也证明大米多肽具乙磺酸、N-（2-羟乙基）哌嗪-N'-2-乙烷磺酸[5-7]有显著的降血压活性，因此用大米蛋白制备降（HEPES），购自Sigma公司；氢氧化钠等均为分析血压多肽具有良好的应用潜力。纯试剂，购于国药集团化学试剂有限公司；血管紧目前，制备大米多肽的常用传统方法是酶张素转化酶（ACE），本实验室提自猪肺[13]

5、。[8-9]法，该方法存在酶解效率不高，产物活性较低的1.1.2主要仪器与设备隆达HF-25B超声循问题。近年来有研究表明，采用超声波预处理或超环提取机，北京弘祥隆生物技术开发有限公司；全声辅助酶解技术，可以显著提高蛋白质的酶解效波长酶标分析仪，美国Multskan公司；精密pH[10-12]率，改善产物的活性。本文将底物蛋白的超声计（PHS-3C），上海精密科学仪器有限公司；Pelli-预处理技术应用于大米降血压肽的制备研究，考con小型超滤系统，美国Millipore公司；离心机察该产品不同超滤产物ACE抑制率及对原发性（LD5-2A型），北京医

6、用离心机厂；大鼠血压计高血压大鼠的降血压效果，为大米蛋白的进一步（RBP-1型），中日友好临床医学研究所。1.2试验方法收稿日期：2010-01-281.2.1工艺流程粉碎大米蛋白→加水浸泡→超基金项目：国家自然基金（31071502）；科技部国际合作项目声预处理→酶解→离心→检测对ACE的抑制率。（2009DFA32000）；国家863计划（2007AA10Z321）1.2.2超声预处理大米蛋白的正交试验设计在作者简介：马海乐，男，1963年出生，博士，教授第10卷第6期基于超声预处理的大米降血压多肽的制备及其功能评价37前期单因素试验的基础上，对

7、超声预处理条件进1.2.5半抑制浓度（IC50）的测定称取一定量的行正交优化试验。所选优化试验的因素为超声功样品，配成不同浓度的溶液，测定其对ACE的抑率、超声处理时间、超声工作间歇时间比和循环速制率。绘制浓度-抑制率曲线，回归方程，通过曲线度，因素水平见表1。经预试验后，对大米蛋白进方程计算抑制率为50%所对应的浓度值，即IC50[15-16]行酶解反应。酶解参数：料液比1∶25、加酶量（E/S）值。7.5%、pH9.5、温度50℃、酶解时间30min。酶解结1.2.6大米ACE抑制肽抗消化道酶试验超滤液束后沸水浴灭酶10min，经3000r/mi

8、n离心10对肠胃蛋白酶耐受性试验参考YoshiiH的方[17]min，收集上清液，测定上清液对ACE的抑制率