il-35在病毒性心肌炎发病中的作用及其机制研究

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1、硕士学位论文论文题目IL-35在病毒性心肌炎发病中的作用及其机制研究研究生姓名胡亚东指导教师姓名熊思东专业名称免疫学研究方向感染与免疫论文提交日期苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：胡亚东日期：2013-05-162苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大

2、学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社）、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文□本学位论文属在年月解密后适用本规定。非涉密论文□论文作者签名：胡亚东日期：2013-05-16导师签名：熊思东日期：2013-05-16IL-35在病毒性

3、心肌炎发病中的作用及其机制研究中文摘要中文摘要病毒性心肌炎(Viralmyocarditis,VMC)是一种病毒感染引起的心血管疾病，多种病毒都可引VMC，其中以肠道病毒CoxsackievirusB3(CVB3)感染最常见，严重危害人类健康。目前研究认为，CVB3诱导的心肌炎发病机理包括病毒对心肌的直接损伤和过强免疫应答导致的间接损伤，但其具体的发病机制并未完全阐明。IL-35是新发现的由Treg细胞特异性产生的IL-12细胞因子家族新成员，结构上是由p35和EBI3亚基组成的异源二聚体，是Treg细胞发挥最大抑制效应所必须的一种细胞因子。它可以扩增Treg细胞，诱导i

4、TR35细胞产生和促进Th1细胞分化，以及抑制效应T细胞产生和Th17细胞分化，在自身免疫病、病毒感染和真菌感染等疾病中发挥重要作用。为了探讨IL-35在CVB3感染的病毒性心肌炎发病中的作用及其机制，我们建立了CVB3诱导的BALB/c小鼠病毒性心肌炎模型，通过病理切片及其评分显示心肌炎炎症程度在感染后第0、3、5、7天的动态变化情况，同时运用ELISA方法检测了病毒性心肌炎小鼠心脏中IL-35在CVB3感染后第0、1、3、5、7、9天动态表达情况，并对第七天小鼠心肌组织病理评分、体重改变与心肌组织中IL-35表达分别做了相关性分析。在此基础上，我们通过PEI包裹IL-

5、35真核表达质粒，腹腔注射老鼠的方法过表达模型小鼠心肌组织中IL-35，并运用FACS、ELISA、Real-timePCR等实验技术检测相关指标，研究IL-35在VMC中发病的作用及其机制。首先我们通过建立雄性BALB/c小鼠病毒性心肌炎模型，研究病毒性心肌炎中IL-35的表达与心肌炎发病严重程度的相关性。我们记录了CVB3感染后小鼠体重变化情况，通过病理切片观察CVB3感染后第0、3、5、7天心肌炎炎症严重程度变化，运用ELISA的方法检测感染后第0、1、3、5、7、9天心脏中IL-35表达水平，并对感染后第七天两者做了相关性分析。结果发现:雄性BALB/c小鼠在CV

6、B3感染后第3天左右体重明显下降并持续减轻，同时心肌组织出现明显病变并逐渐加剧，而IL-35的表达在感染后第1、3天逐渐升高，第5、7、9天逐渐下降。并且第七天心肌组织中IL-35的表达与小鼠体重下降和心肌评分呈负相关。随后，我们研究IL-35在病毒性心肌炎中的作用及其可能的机制，通过腹腔注射PEI包裹的I中文摘要IL-35在病毒性心肌炎发病中的作用及其机制研究IL-35质粒在心肌组织中过表达IL-35，随后观察小鼠感染CVB3后一系列体征变化，包括生存率、体重变化曲线、心体比、CK、CK-MB以及心肌病理评分，我们发现过表达IL-35对CVB3诱导的病毒性心肌炎具有保护

7、作用，与未处理组和载体FC组相比得到显著改善,且心肌组织中病毒载量和病毒复制都有显著下降。由于CVB3感染引起的对心肌组织的炎症反应的特异性免疫应答，是其发病的重要机制之一。研究认为Th17细胞和Treg细胞在病毒性心肌炎中扮演中重要免疫调节作用，在我们的实验中，感染CVB3后第七天的小鼠体内，过表达IL-35抑制了脾脏Th17细胞及其相关细胞因子的表达，而对Treg细胞表达没有显著影响；心脏中Th17相关促炎细胞因子TNF-α、IL-17A、IL-6表达与对照组相比，均有显著下调。综上所述，本研究首次在CVB3诱导的病毒性心