mir-21在病毒性心肌炎发病中的作用及其机制

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3、病毒性心肌炎(viralmyocarditis，VMC)是一临床常见心血管系统疾病。近年来在我国和欧美各国急性病毒性心肌炎的发病率呈上升趋势，已成为青少年不明原因猝死的主要原因之一。病毒感染是病毒性心肌炎的重要病因之一，其中肠道病毒尤其是B3型柯萨奇病毒(CoxsackievirusgroupBtype3，CVB3)感染引起的病毒性心肌炎占发病人数的一半以上。迄今，病毒性心肌炎发病机制还不完全清楚。微小RNA是近年发现的内源性非编码RNA小分子，主要在转录后水平调控基因表达，参与包括发育、肿瘤生

4、成、病毒性疾病、免疫性疾病在内的多种生理及病理过程。为了探讨miR．21在病毒性心肌炎发病中的作用及其机制，我们通过建立CVB3诱导的BALB／cd、鼠病毒性心肌炎模型，设计茎环结构(stem．100p)的miRNA特异性的逆转录引物，进行实时定量Real．timePCR，检测了CVB3诱导的病毒性心肌炎心脏组织中16种miRNAs的表达。在此基础上，我们对感兴趣的miRNA．21，进一步细致研究了病毒感染剂量和感染时间对其表达水平的影响；通过上调心肌组织中miRNA．21的表达量，运用FACS

5、、免疫荧光、免疫组化、Real—timePCR等实验技术检测相关指标，研究miRNA．21在VMC发病中的作用及其机制。本研究中我们首先探讨，CVB3诱导的病毒性心肌炎中miRNAs表达谱变化。在16着00miRNAs中，CVB3感染组心肌组织中的miR．29b、miR-92a、miR-126．5p、miR-126．3p、miR．499a、miR．210和miR-208b表达上调，分别是对照组的9．79、411．52、196．07、1359．50、20．89、47．56和1140．32倍(P<0

6、．0001)，有显著性差异。miR．21、miR．133a、miR．199a和miR．320表达低于对照组，分别下降了4．55、19．43、1．67和9．69倍(P<0．001)。而其中的另外5个miRNAs，miR．1．1、miR-15b、miR-26a、miR．27a和miR．122均未检测到表达。随后，研究miR．21在病毒性心肌炎中的作用。发现miR．21的表达水平在CVB3感染后1、3和5天逐渐升高，第7天显著下降。并且心脏组织中miR．21的表达与体重变化率(r2=0．3394，P<

7、O．05)呈现正相关，血清肌酸激酶(CK)水平(r2=0．4176，P<0．01)和心肌病理评分(r2：0．6075，P<0．001)中文摘要miR．21在病毒性心肌炎发病中的作用及其机制呈现负相关；在心肌组织中过表达miR一21，CVB3感染后的一系列体征变化包括体重变化率、CK、心肌病理评分和生存率，与CVB3组和tpMDH+CVB3对照组比较显著改善，但是病毒载量显著上升。CVB3感染通过诱导心肌细胞的凋亡，是其发病机制之一。病毒诱导的心肌凋亡在感染后第7天显著上升，过表达miR．21显著

8、降低病毒性心肌炎心肌细胞的凋亡，并且通过下调其靶基因程序性死亡因子(PDCD4)的表达实现其抑制凋亡功能。综上所述，本研究首次发现miRNAs在CVB3诱导的病毒性心肌炎的表达谱发生变化，其中miR．21表达显著下调。通过心肌组织中过表达miR-2I，能够改善CVB3诱导的小鼠病毒性心肌炎疾病症状，其具体机制是通过抑伟EJPDCD4的表达，增强心肌细胞抗凋亡的作用。进一步阐明了miR一21在病毒性心肌炎发病中的作用，不仅为病毒性心肌炎的防治提供了潜在的途径，也为其病毒性心肌炎的发病机制提供了新的