成年小鼠中风后小胶质细胞激活的时间依从性研究

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1、万方数据复旦大学上海医学院2013年硕士论文复旦大学硕士学位论文成年小鼠中风后小胶质细胞激活的时间依从性研究院系：基础医学院专业：神经生物学姓名：郭延岭指导教师：高艳琴教授导Nd,组：胡晓明助理教授陈俊教授万方数据目录YIIIl2I7IIIoRi3ll剃缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。2Abstract．⋯．⋯．⋯．．⋯．．⋯．⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯．⋯．．．．．．⋯⋯．．．．．⋯．．．．．ql前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．6材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．8实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．17讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。31致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。32参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。34综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。35万方数据复旦大学上海医学院2013年硕士论文缩略词表TableofabbreviationMCAOmiddlecerebralarteryocc

3、lusion大脑中动脉栓塞RT-PCRreversetranscriptionpolymerasechainreaction逆转录聚合酶链式反应CMculturemedium培养基PBSphosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液TritonX-100聚乙二醇辛基苯基醚OGDoxygenandglucosedeprivation氧糖剥夺LPSlipopolysaccharide脂多糖ddH20doubledistilledwater双蒸水TrisTris(hydroxymethyl)aminomethane三(羟甲基)氨基甲烷PFAparaformaldehyde多聚

4、甲醛tPAtissue—typeplasminogenactivator组织型纤溶酶原激活剂TGF—Btransforminggrowthfactor-beta转化生长因子13GDNFglialcellline-deprivedneurotrophic胶质细胞源性神经营养因子家族BDNFbrain—derivedneurotrophicfactor脑源性神经营养因子DMEMDulbeccomodifiedEaglemedium杜尔伯科改良伊格尔培养基万方数据复旦大学上海医学院2013年硕士论文中文摘要背景：2012年，中国的流行病调查表明中风已经成为我国发病率最高的疾病，其致残率也

5、位于世界榜首。根据中风的病因，中风可以分为缺血性中风和出血性中风。其中，缺血性中风占到中风的85％。小胶质细胞是脑内特有的一种细胞，它是神经系统固有的免疫性细胞，占成年动物脑内细胞总数的5％一10％左右，主要参与了脑内的抗原呈递、吞噬以及分泌促炎、抗炎因子等过程。众多科学家都认为中风的炎症状况发生后，小胶质细胞的作用如一把双刃剑，有好有坏。关于小胶质细胞在中风后的作用，很多工作已经开展。目前公认的小胶质细胞在中风后的作用可以分为两个阶段——M1和M2，并且不同时期的作用已经得到初步的研究。但是，中风后小胶质细胞在不同时程的作用至今还不是十分清楚。本课题旨在通过中风后小胶质细胞表面不

6、同分子的表达情况来反映小胶质细胞所处的不同功能状态，从而探究小胶质细胞在中风后发挥的作用，对今后针对小胶质细胞的靶向治疗具有开拓性指导意义。方法：采用成年雄性C57／BI。6小鼠的MCAO模型作为缺血性脑损伤动物模型；运用RT-PCR的方法测定脑组织内M1期和M2期不同的标记物分子mRNA水平时间依从性的表达情况：采用免疫荧光染色、共聚焦成像等方法观察缺血性脑损伤后皮层、纹状体、胼胝体等不同脑区小胶质细胞激活的时间依从性；体外实验中，一方面将原代培养的神经元OGD损伤后的培养基干预小胶质细胞，观察小胶质细胞的激活情况；另一方面，分别用M1或M2期的诱导物(LPS或者IL．4)刺激小

7、胶质细胞激活后，再与经过OGD处理的神经元共培养，观察不同激活状态的小胶质细胞对神经元存活的影响。结果：与假手术相比，小胶质细胞的M2激活状态在中风之后的第1．3天开始出现，第3—5天达到最大化，第7天开始下降，第14天恢复到损伤之前的状态：而M1的激活状态多出现在中风损伤的后期，从第3天开始均表达量上升，这种高表达情况一直持续到中风损伤后的第14天。体外实验表明，OGD之后的神经元可以诱导小胶质细胞向M1的状态激活，这种激活状态下的小胶质细胞的吞噬能力下降并分泌更多