vegf-b基因靶向sirna对肝癌细胞裸鼠皮下种植瘤vegf-b蛋白表达的影响

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1、学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。研究生签名：相亲l氢导师签章：二级学院领导盖章：、1●沙J弓篾．。多月矽日、。≮’、：气：、j“≈i：，河北医科大学研究生学位论文独创性声明成果，指导教师对此进行了审定。

2、本论文由本人独立撰写：文责自负。研究生签名：囱麦遢导师签章／彳多勿缈伽J弓华弓月多衫日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3研究论文VEGF．B基因靶向siRNA对肝癌细胞裸鼠皮下种植瘤VEGF．B蛋白表达的影响前沿⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯‘l6附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯‘17附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·22讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·24结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·28参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·28综述RNA干扰技术及VEGF家族与原发性肝癌的研究进展⋯⋯32致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·44个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·45中文摘要VEGF．B基因靶向siRNA对肝癌细胞裸鼠

4、皮下种植瘤VEGF—B蛋白表达的影响摘要目的：原发性肝癌(以下简称肝癌)为常见的恶性肿瘤之一，发病隐匿，进展速度快，预后差。目前对于肝癌的治疗主要是以手术为主的综合治疗，包括：手术切除、射频消融、微波固化、化疗栓塞(TACE)、放射治疗、生物免疫治疗等，手术切除为目前最主要、最有效的方法，但患者术后5年生存率低，主要是因为患者术后肿瘤的复发及转移。肿瘤的生长及转移依赖于新生血管的形成，血管的新生是一个多因素调节的过程，血管内皮生长因子(VEGF)是促进血管形成的重要调节因子之一，VEGF除具有促进血管形成作用外，还具

5、有促进淋巴管形成、调节脂质代谢、保护及营养神经等作用，并且与肿瘤的发生、进展密切相关。现已发现VEGF家族共有7个成员，VEGF．B为其中重要的一员，我们前期的研究发现肝癌的发生、发展与VEGF．B密切相关。RNA干扰(RNAinterference，RNAi)为转录后的基因沉默，可以实现对目的基因的高特异、高效沉默，小干扰RNA(siRNA)是RNA干扰中主要介导因子。本实验从人类VEGF．B基因中选取3个靶点，利用RNA干扰技术体外构建3个VEGF．B基因靶向siRNA，转染人肝癌细胞HepG2细胞并建立裸鼠皮下

6、种植瘤模型，观察抑制VEGF．B基因后对肝癌细胞裸鼠皮下种植瘤的影响，从而为肝癌的基因治疗提供新的靶点及理论依据。方法：从人VEGF—B基因中选取3个靶点，利用RNA干扰技术体外构建3个靶向siRNA。常规培养人肝癌细胞HepG2细胞，借助质粒载体将阴性空白对照质粒及3个阳性VEGF—B基因靶向siRNA质粒转染入HepG2细胞(转染后分别命名为：Bt0，Btl，Bt2，Bt3)，转染48小时后观察转染效率，用blasticidin稳定筛选并培养扩增。将24只裸鼠随机分成4组，并将转染筛选后的4组细胞种植于裸鼠皮下，

7、建立裸鼠皮下种植瘤模型(分别命名为：mBt0组，mBtl组，mBt2组，mBt3组)。常规饲养裸鼠并观察裸鼠皮下种植瘤的生长情况，30天后处死裸鼠，并测量计算皮下种植瘤的体积和重量，利用Westernblot方法检测种植瘤VEGF．B中文摘要蛋白表达情况。结果：1以质粒为载体，可成功将体外构建的VEGF—B基因靶向siRNA转染入肝癌细胞HepG2细胞，转染48小时后，转染效率可达70～75％。2对照组mBt0组与实验组mBtl组、mBt2组、mBt3组裸鼠皮下均成瘤，3个实验组裸鼠皮下种植瘤生长速度较对照组缓慢，3

8、0天后种植瘤体积分别为：(1．671+0．131)cm3、(1．083-{-0．224)cm3、(1．252+0．204)cm3、(1．127+0．276)cm3，瘤体重量分别为：(1．049+0．104)g、(O．681+0．130)g、(O．804+0．119)g、(0．733+0．138)g。3个实验组瘤体的体积及重量均显著小于阴性对照组