vegf-b基因靶向sirna对肝癌细胞裸鼠皮下种植瘤的影响

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1、目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3研究论文VEGF—B基因靶向siRNA对肝癌细胞裸鼠皮下种植瘤的影响前沿⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28综述血管内皮生长因子家族及小干扰RNA与原发性肝癌的研究进展31致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44中文摘要VEGF．B基因靶向siRNA对肝癌细胞裸鼠皮下种植瘤的影响摘要目的：原发性肝癌(简称肝癌)是我国常见的消化系统恶性肿瘤之一，起病隐匿、恶性程度高、进展迅速，多数患者在症状出现时已处于中晚期而错失手术机会，手术治疗仍是治疗肝癌的首选方法，但多数患者在术后2年内出现肿瘤复发，术后肿瘤转移和复发已成为影响肝癌患者能否

3、长期生存的主要问题，而肿瘤血管新生是肿瘤生长和转移的主要原因。血管内皮生长因子家族(vascularendothelialgrowthfacterfamilymembers，VEGFs)在血管新生过程中起关键作用。作为VEGF家族成员之一的VEGF．B在肝癌进展过程中呈现高表达状态，并影响肝癌患者的预后。因此抑制VEGF．B基因表达有望成为治疗肝癌的一种新手段。RNA干扰(RNAinterference，RNAi)是通过一定途径将与内源性mRNA编码区同源的双链RNA(doublestrandedRNA，dsRNA)导入细胞内，致该mRNA发生降解而产生基因表达沉默的效果。其中小干扰RNA

4、(smallinterferenceRNA，siRNA)是RNAi的主要效应分子，是由20多个核苷酸组成的小片段dsRNA分子。以质粒或者病毒为载体将靶向基因siRNA导入细胞，并对特定基因产生沉默。本研究利用RNAi技术，设计针对VEGF—B基因的siRNA，转染肝癌细胞株HepG2细胞，通过建立裸鼠皮下种植瘤模型，观察实验组与对照组种植瘤的生长情况，并应用免疫组织化学染色法检测各组VEGF—B蛋白表达情况。方法：利用RNAi技术，将体外合成的VEGF．B基因靶向siRNA转染入人肝癌细胞株HepG2细胞，分别建立阴性组(对照组)EgO以及三个阳性组(实验组)Egl、E92、E93。用B

5、lasticidin稳定筛选后，进行培养扩增，最后共得到四组HepG2细胞：三组VEGF．B基因靶向siRNA阳性质粒转染组(Egl、E92、E93)、阴性对照空载质粒转染坌g(E90)。然后分别接种于4组裸鼠皮下(每组6只，随机分配)，建立人肝癌细胞裸鼠皮下种植瘤模型，即Ec0组、Ecl组、Ec2组、Ec3组。定期观察裸鼠皮下种植瘤的生长情况，30天后处死裸鼠，对比测量4组裸鼠皮下种植瘤的体积、重量，并用免疫组织化学染色法检测分析VEGF。B蛋白的表达。采中文摘要用Image．ProPlus6．0图像分析系统进行相对定量分析，计算每个视野的单位面积内阳性染色积分光密度值(IOD)，取其均

6、值进行统计分析。．结果：1以含荧光标记的质粒为载体，成功将VEGF—B基因靶向siRNA转染入人肝癌细胞HepG2细胞，48小时后转染效率均达60～70％。224只裸鼠皮下均成瘤，3个实验组裸鼠皮下种植瘤平均生长速度较对照组缓慢，30天后种植瘤体积对照组为：(1．698+0．137)cm3，实验组分别为(1．107+0．355)cm3、(1．229+0．099)cm3、(1．162+0．188)cm3，瘤体重量对照组为：(1．068+0．086)g，实验组分别为：(O．696士0．224)g、(O．772+0．062)g、(O．730+0．1l8)g。3个实验组种植瘤体积及重量均显著小于对

7、照组(尸