人小细胞肺癌细胞的干细胞特性与诱导分化

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1、人小细胞肺癌的干细胞特征与诱导分化括：肿瘤干细胞标记物(CDl33)，多能干细胞标记物(Sail4、Oct4)，神经嵴干细胞标记物(Nestin)，神经细胞黏附分子(NCAM)，神经胶质细胞标记物(s10013)，间充质干细胞标记物(Vimentin、CD44、CDl05)。2．多数NCI．H446细胞在贴壁或者锚定非依赖性生长的培养条件下均能克隆增殖。在单细胞贴壁克隆增殖实验中，初级克隆形成率为95％(54／57)，而初级克隆形成的子代克隆形成率达到100％(55／55)。在由软琼脂形成的锚定非依赖性环境里，多数细胞也都能形成克隆。3．NCI．H446细胞具有稳定的致瘤性。NCI．H4

2、46细胞可以在裸鼠皮下形成移植瘤，也可在肺部形成原位移植瘤；细胞种于皮下和肺内均是先形成癌巢，再逐渐形成实体瘤。瘤体细胞能表达多种干细胞标记物，转录因子标记物和细胞增殖核抗原(Ki67)。4．经曲古抑菌素A(TSA)诱导后，NCI．t-t446细胞可分化成神经细胞。免疫荧光和Westenblotting的结果表明，诱导后神经细胞标志物有所表达，自噬与凋亡相关蛋白表达增高，而增殖相关蛋白表达下降。5．NCI．H446细胞可分化成脂肪细胞。经脂肪细胞诱导和维持培养基处理三个周期后，油红染色可见细胞内积成大量脂滴：Westernblotting结果表明脂肪细胞相关蛋白大量表达。6．NCI．H4

3、46细胞可以成骨细胞转化。茜素红染色与Westernblotting结果显示Sirtl／2通路的抑制剂能够抑制成骨，而激动剂则促进成骨；表明Sirtl／2通路与成骨诱导相关；诱导作用下，骨细胞相关蛋白表达，而自噬与凋亡蛋白也随之升高。7．裸鼠体内皮下移植瘤能够在成骨诱导处理下停止增长和钙化。利用成江苏大学硕士学位论文骨诱导剂对皮下移植瘤持续处理4周，钼靶X线的结果表明：对照组瘤体生长较快，组成均一；而诱导处理组瘤体较小，中心出现钙化。结论：小细胞肺癌(NCI．1-1446)细胞能表达出神经外胚层与中胚层干细胞的特征。具有干细胞特性、强致瘤和可塑性，可被诱导终末分化且出现自噬、凋亡。结果表

4、明，诱导分化治疗对于小细胞肺癌是一种潜在的、有效的治疗方法，具有低全身毒性和靶向作用于肿瘤干细胞等特点。关键词：小细胞肺癌；千细胞特性；致瘤性；可塑性；分化；自噬；细胞凋亡；诱导分化治疗人BSTRACT人小细胞肺癌的干细胞特征与诱导分化Objective：Bystudyingthesternness，tumorigenicity，andplasticityforinducingdifferentiationsoftheSCLCNCI—H446cells，toexplorethemechanismsofinducingdifferentiationanddeathofthesecancel

5、'cellsandprovideatheoreticalandexperimentalbasisfortranslationalapplicationsintreatmentsofSCLCwithinducingdifferentiationtherapy．Methods：1．Fordetectingexpressionofstemcellmarkers，thepassagedcancercellswereculturedonplasticplatesorlaminin-coatedglasscoverslips，for2days，fixedusing4％paraformaldehyde

6、andthenimmunofluorescence-stainedwithantibodiesagainstcancerstemcelmarker，phripotentstemcellmwkers，neuralcreststemcelmarkersandmesenchymalstemcellmarkers．Thesestainedcancercellswereobservedwithimmunofluorescencemicroscope(AxioObserver,ZEISS，Germany)．2．Thecelswereresuspendedinfreshmedium,dilutedto

7、10cells／mlusinglimitingdilutionprocedures，seededinto96-wellplates．Thewellswithordyonecellweremarkedandobserveddailyunderphasecontrastmicroscope．Aftercultured1week，thecloneswerecounted，dissociatedandculturedasaboveinnew