den2感染对huvec自噬的影响

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1、贵阳医学院2013届硕士学位论文《中国图书资料分类法》分类号：R392.12单位代号：10660学号：S100022贵阳医学院2013届硕士学位论文DEN2感染对HUVEC自噬的影响研究生：杨杨导师：左丽教授年级：2010级专业：免疫学国家自然科学基金（31260224）2013年3月19日-1-贵阳医学院2013届硕士学位论文目录摘要„„„„„„„„„„„„„„3前言„„„„„„„„„„„„„„5材料与方法„„„„„„„„„„„„7结果„„„„„„„„„„„„„„20讨论„„„„„„„„„„„„„„26参考文献„„„„„„„„„„„„„30英

2、文摘要„„„„„„„„„„„„„37致谢„„„„„„„„„„„„„„39略缩词表„„„„„„„„„„„„„40论文原创性声明„„„„„„„„„„41附：综述„„„„„„„„„„„„42-2-贵阳医学院2013届硕士学位论文DEN-2感染对HUVEC自噬的影响专业：免疫学研究生：杨杨导师：左丽教授[摘要]目的利用登革2型病毒NGC株（DEN2）感染人血管内皮细胞（HUVEC），研究DEN2对HUVEC自噬的影响，为研究DEN2感染损伤血管内皮细胞的机制提供科学依据。方法50%组织细胞感染量（TCID50）测定DEN2NGC株病毒对C6/36细胞的

3、毒力；实时荧光定量PCR检测DEN2感染HUVECDEN2mRNA水平表达的变化；Western-blot检测DEN2感染对HUVEC自噬标记性蛋白LC3B表达的影响；激光共聚焦显微镜观察DEN2感染HUVEC自噬发生的现象，DEN2感染剂量为41×10TCID50。结果1.细胞贴壁呈梭形，生长良好，轮廓清晰，符合HUVEC生长特点；免疫组化法检测HUVECⅧ因子的表达，DAB染色后与空白对照对比可见细胞着色呈棕黄色。-5.62.DEN2对C6/36细胞的TCID50为10。3.实时荧光定量检测DEN2感染HUVEC后DEN2mRNA。随DEN

4、2感染剂量增加，病毒感染HUVEC组24h时DEN2mRNA表达增加并呈上升趋势，有统计234学意义（P<0.05）；用巴伐洛霉素A1作用抑制后，1×10、1×10、1×10TCID50DEN2感染组DEN2mRNA表达增加并呈上升趋势，有统计学意义（P<0.05）；与未用巴伐洛霉素A1抑制相比，相同TCID50DEN2感染HUVEV的DEN2mRNA的表达减少，有统计学意义（P<0.05)。4.Western-blot检测DEN2感染后24h对HUVECLC3BⅡ/Ⅰ比值的变化。与空23白对照组相比，1×10、1×10TCID50DEN2感染

5、组，LC3BⅡ/Ⅰ比值上升，4LC3BⅡ、Ⅰ条带灰度值增加；1×10TCID50DEN2感染组LC3BⅡ/Ⅰ比值上升，LC3BⅡ、Ⅰ条带灰度值增加,有统计学意义（P<0.05）；用巴伐洛霉素A1作用抑234制后，与空白对照组相比，1×10、1×10、1×10TCID50DEN2感染组LC3BⅡ/Ⅰ2比值上升，LC3BⅡ、Ⅰ条带灰度增加。与未用巴伐洛霉素A1抑制相比，1×10、-3-贵阳医学院2013届硕士学位论文341×10、1×10TCID50DEN2感染组，LC3BⅡ/Ⅰ比值上升，LC3BⅡ、Ⅰ条带灰度值增加。5.激光共聚焦显微镜检测24h

6、HUVEC自噬现象，自噬标记蛋白LC3B（绿色）、溶酶体标记蛋白LAMP1（红色）、DEN2NS1（橘黄色）。在正常HUVEC，胞浆内可观察到绿色荧光、红色荧光，荧光合成后，绿色、红色荧光重叠；用巴伐洛霉素A1作用抑制后，HUVEC胞浆内可观察到绿色、红色荧光强度增加，荧光4合成后，绿色、红色荧光重叠部分减少；与正常HUVEC相比，1×10TCID50DEN2感染组，在胞浆内可观察到绿色、红色、橘黄色荧光，绿色、红色荧光强度增加，在荧光合成后，绿色、红色与橘黄色荧光重叠。结论1.在24hDEN2感染HUVEC后，随着DEN2感染剂量增加，HUV

7、ECDEN2载量增加；加巴伐洛霉素A1抑制后，DEN2增殖被抑制。2.DEN2可诱导HUVEC自噬增强；巴伐洛霉素A1可抑制DEN2感染HUVEC自噬的发生。3.DEN2感染HUVEC后，在胞浆内DEN2NS1与自噬标记性蛋白LC3B、溶酶体标记蛋白LAMP1共定位。关键词DEN2HUVEC自噬LC3BLAMP1巴伐洛霉素A1-4-贵阳医学院2013届硕士学位论文1.前言登革病毒（denguevirus，DEN）属于黄病毒科黄病毒属，为被覆包膜的单股正链RNA病毒，分为1、2、3、4四个血清型，其中DEN2引起的症状较为严重。DEN主要通过埃及

8、伊蚊（Aedesae－gypti）和白纹伊蚊(Aedesalbopictus)等媒介昆虫传播，引起登革热（denguefever，DF）以及死亡率很高