利用hsv1 α-基因启动子构建真核表达载体phie

《利用hsv1 α-基因启动子构建真核表达载体phie》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、第21卷4期中国病毒学21（4）：328-3322006年7月VIROLOGICASINICAJuly2006*利用HSV1α-基因启动子构建真核表达载体phIE**寸韡，刘龙丁,张莹,罗杰，吴文娟，张雪梅，廖芸，李琦涵（中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所，云南昆明650118）ConstructionandApplicationofEukaryoticExpressionVectorphIEContainingHSVIα-genePromoterCUNWei，LIULong-ding，ZHANGYing，

2、LUOJie，WUWen-juan，ZHANGXue-mei，**LIAOYun，LIQi-han(InstituteofMedicalBiology,ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCollege,Kunming650118，China)Abstract：AneukaryoticexpressionvectorphIEcomposedofpcDNA3skeletonandtheherpessimplexvirusimmediateearlygen

3、epromoterwasconstructedtoprovideanewchoiceforectopicexpression.TheplasmidphIE-Us1wasconstructedbyinsertingtheus1cDNAdownstreamofthepromotertoanalyzethefunctionofICP22proteinveryearlyintheinfectionprocess.Furthermore,thegeneencodingthechloramphenicolacetyl-transf

4、erasewasinsertedintothemultiplecloningsiteoftheexpressionvectortoyieldthephIE-CAT.InfunctionalanalysisofviralproteinICP22andVp16,phIE-CATwasconfirmedtobecapableofevaluatingthemechanismofthegenomeofherpessimplexvirus1transcriptionalregulation.Keywords：Herpessimpl

5、exvirus;Immediateearlygene;Vector;Promoter摘要：以pcDNA3质粒为骨架，构建由1型单纯疱疹病毒(HerpessimplexvirusI,HSVI)立即早期基因启动子指导外源蛋白转录的phIE真核表达载体，该质粒为外源蛋白的表达提供了更为广泛的选择，通过插入us1编码序列，phIE-Us1被用于分析ICP22蛋白在病毒感染早期的功能；在多克隆位点插入氯霉素乙酰转移酶编码基因构建phIE-CAT检测载体，应用于检测HSVI病毒蛋白Vp16及ICP22的功能，明确显示该质粒对于研究

6、单纯疱疹病毒的基因转录调控具有重要的应用价值。关键词：单纯疱疹病毒，立即早期基因，载体，启动子中图分类号：Q786文献标识码：A文章编号：1003-5125(2006)04-0328-05随着病毒分子生物学研究的深入，利用各种病simplexvirusI，HSVI）的分子生物学研究中，亦注毒基因启动子构建真核表达载体的技术已日益广意到其α、β、γ基因上游序列具有转录启动子所表[1][3]泛。目前，已有多种含有病毒启动子的真核表达现的特性，尤其是α基因的启动子，能够分别指载体以商业化或研究用的形式问世。其中，具有人导五个

7、α基因编码蛋白ICP0、ICP4、ICP22、ICP27巨细胞病毒（CMV）和空泡病毒SV40基因启动子和ICP47的转录启动，这些启动子均具有典型的结的pcDNA系列及pSV系列真核表达载体最为实验构特点，包括Sp1结合基序、病毒蛋白Vp16的结[2][4~6]室常用。它们作为一类非特异性外源基因的表达合基序以及GABP结合基序等等。这些元件组载体，具有重要的应用意义。同时，许多工作在与成了较完整的启动子结构，并与CMV、SV40基因CMV和SV40同属DNA病毒的单纯疱疹病毒（Herpes启动子类似，因而亦具备了作

8、为一个真核表达载体收稿日期：2005-12-31,修回日期：2006-03-24*基金项目：国家自然科学基金资助项目(30370065,30570081)。作者简介：寸韡（1980-），男，云南省籍，博士，主要从事病毒免疫学研究。**通讯作者.Correspondingauther.Tel:0871-8335905,E-mail：