氧糖剥夺后处理在氧糖剥夺—再灌注损伤中的保护作用及可能机制

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1、单位代码10475学号104753101216分类号R743.3硕士学位论文氧糖剥夺后处理在氧糖剥夺-再灌注损伤中的保护作用及可能机制学科、专业:神经病学研究方向:脑血管病的基础与临床申请学位类别:医学硕士申请人:田向阳指导教师:赵建华教授二〇一三年五月Theprotectionandpossiblemechanismofoxygen-glucosedeprivationpostconditioninginoxygen-glucosedeprivation-reperfusioninjuryADissertationSubmitted

2、ToTheGraduateSchoolOfHenanUniversityInPartialFulfillmentOftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineByTianXiangyangSupervisor:Prof.ZhaoJianhuaMay,2013关于学位论文独创声明和学术诚信承诺本人向河南大学提出硕士学位申请。本人郑重声明:所呈交的学位论文是本人在导师的指导下独立完成的,对所研究的课题有新的见解。据我所知,除文中特别加以说明、标注和致谢的地方外,论文中不包括其他人已经发表或撰

3、写过的研究成果,也不包括其他人为获得任何教育、科研机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。在此本人郑重承诺:所呈交的学位论文不存在舞弊作伪行为,文责自负。学位申请人(学位论文作者)签名:2013年月日关于学位论文著作权使用授权书本人经河南大学审核批准授予硕士学位。作为学位论文的作者,本人完全了解并同意河南大学有关保留、使用学位论文的要求,即河南大学有权向国家图书馆、科研信息机构、数据收集机构和本校图书馆等提供学位论文(纸质文本和电子文本)以供公众检索、查阅。本人授

4、权河南大学出于宣扬、展览学校学术发展和进行学术交流等目的,可以采取影印、缩印、扫描和拷贝等复制手段保存、汇编学位论文(纸质文本和电子文本)。(涉及保密内容的学位论文在解密后适用本授权书)学位获得者(学位论文作者)签名:2013年月日学位论文指导教师签名:2013年月日摘要脑梗死(cerebralinfarction)是一种具有高发病率与高致残率的脑血管疾病。其主要病理是血栓堵塞血管导致的神经细胞缺血性死亡,对其最有效的疗法是溶栓治疗以恢复缺血组织的血供,但会造成脑缺血-再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤。缺

5、血后处理(ischemicpostconditioning,IPostC)是一种在组织器官发生缺血损伤后,再灌注恢复之前,给予多次短暂交替的亚致死性缺血与再灌注的处理方式。已经在一些实验与临床中证实它具有抗I/R损伤的作用,并且IPostC在再灌注前施行,可操作性好。现有的研究认为,IPostC发挥作用的主要靶点是细胞凋亡与PI3K/Akt信号通路,但其具体机制仍未阐明。目前,IPostC对脑I/R损伤影响的研究较少,多以动物模型为研究对象,对其在体外细胞模型中的作用及机制研究很少。本研究拟通过使用体外培养的SK-N-SH细胞,改进建

6、立氧糖剥夺-再灌注(oxygen-glucosedeprivation/reperfusion,OGD/R)损伤的细胞模型,以模拟体内I/R损伤,同时通过短暂交替的氧糖剥夺与复氧糖的处理方式实施氧糖剥夺后处理(oxygen-glucosedeprivationpostconditioning,OGDP)以模拟IPostC,观察OGDP对OGD/R的影响及其影响因素。在此基础上,选择OGDP的最适处理方式,进一步探讨OGDP抗OGD/R损伤的机制,为在体外研究脑I/R损伤的机制与治疗靶点提供可靠的实验基础。本研究内容分为两个部分:(1)

7、氧糖剥夺后处理在氧糖剥夺-再灌注中的保护作用。(2)氧糖剥夺后处理对氧糖剥夺-再灌注细胞凋亡的作用及可能机制。第一部分氧糖剥夺后处理在氧糖剥夺-再灌注中的保护作用目的:观察OGDP在OGD/R中的保护作用及其影响因素。方法:应用SK-N-SH细胞进行OGD4h,然后恢复氧糖20h而建立OGD/R模型,并在细胞OGD后实施OGDP。细胞分为对照组(正常培养组)、氧糖剥夺-再灌注组(OGD/R组)与氧糖剥夺后处理组(OGDP组),其中OGDP组根据OGDP的不同处理时间分为1、5、10、15、20、30、60min亚组;根据不同时间窗分为

8、5、10、15、20、30、60min亚组;根据不同循环次数分为1、2、3、4、5、6次循环亚组。MTT比色法检测不同处理组的细胞存活率,I倒置相差显微镜观察细胞形态学的变化。结果:(1)OGDP不同处理时间对细胞存活率

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