莱菔硫烷对原代培养神经元氧糖剥夺复氧损伤的保护作用及机制研究

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1、重庆医科大学硕士学位论文莱菔硫烷对原代培养神经元氧糖剥夺/复氧损伤的保护作用及机制研究姓名：吴雪梅申请学位级别：硕士专业：病理学与病理生理学指导教师：赵涌201205重庆医科大学硕士研究生学位论文莱菔硫烷对原代培养神经元氧糖剥夺／复氧损伤的保护作用及机制研究摘要目的：探讨莱菔硫烷(SFN)对氧糖剥夺(OGD)／复氧(R)损伤的皮质神经元凋亡的影响并探讨其与P13K／AKT通路的关系。方法：(1)新生1d的SD乳大鼠，皮质神经元原代培养5-6d后，细胞被随机分为正常对照组、OGD组、SFN组，SFN+LY组及LY组，建立皮质神经元的OGD模型。(2)1h后复氧，

2、模拟再灌注模型，OGD／R期间给予O．1、0．2、O．5、l、2．5、5pmol／LSFN，P13K抑制剂LY294002(10pmol／L)在OGD／R期间与SFN或不与SFN同时加入神经元。(3)复氧24h后，采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定神经元的存活率，Hoechst33258／PI联合染色法测定细胞损伤程度，免疫荧光和Westernblot观察神经元OGD瓜后Bcl一2、cleavedcaspase-3、Akt和p-Akt的表达。结果：(1)MTT结果显示在SFN处理浓度在1}tmol／L时，可显著增加神国家自然科学基合咨助(No．30900457

3、和No．81070917)重庆医科大学硕士研究生学位论文经元的细胞存活率。(2、)Hoechst33258／PI联合染色结果显示SFN可显著减少神经元的损伤。(3)免疫荧光和Westernblot结果显示SFN增加Bcl一2和p-Akt的表达，减少cleavedcaspase．3的表达。而LY294002抑制p-Akt的表达，减少Bcl．2的表达，增加cleavedcaspase-3的表达。结论：SFN可减轻OGD／R引起的皮质神经元的凋亡损伤，这可能与激活P13K／AKT抗凋亡通路有关。关键词：莱菔硫烷；氧糖剥夺；凋亡；神经保护SULFORAPAHNEPRO

4、TECTSNEURONSAGAINSTINJURYCAUSEDBYOXYGEN—GLUCOSEDEPRIVATION／REOXYGENATIONANDITSMECHANISMABSTRACTObjective：ToinvestigatewhetherSFNprotectsneuronsagainstinjurycausedbyOxygen-GlucoseDeprivation(OGD)／Reoxygenation(R)andthepossiblemechanismsinvolvedinneuroprotection．Methods：(1)Primaryneur

5、onalculturesofcerebralcortexwereobtainedfrom1．day．oldSprague-Dawleyratsonday5-6invitro·(2)ThecorticalneuronswereexposedtoOGDforlh，foUowedbyreo珂genationfor24handweretreatedwith0．1，0．2，0．5，1，2．5，5¨mo儿SFN．for25hduringOGD／R．AP13Kspecificinhibitor(LY294002)(10}lmol／L)wasaddedtocorticalne

6、uronswithorwithoutSFNfor25hd证ngOGD／R．Thecellswererandomlydividedintocontrolgroup，OGDgroup，SFNgroup，SFN+LYgroupandLYgroup·(3)Atter24hreoxygenation，MTTwasusedtoquantifycellviabilityassay；cellinjurywasmeasuredbyHoechst33258／propidium-iodide(PI)重庆医科大学硕士研究生学位论文staining；immunofluorescence

7、stainingandwesternblotwereusedtodetectexpressiononmoleculareventsrelatedtoapoptosis．Resuits：(1)MTTassayshowedthat1}tmol／LSFNsignificantlyincreasedcellviability；(2)While，Hoechst33258／PIstainingshowedthatinjuredneuronswasreducedsignificantlyintheSFNgroup．(3)Furthermore，immunofluoresce

8、ncestainingandweste