人亲磷脂酸磷脂酶a1β亚型基因的克隆与序列分析及真核表达载体的构建

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1、分类号R34密级公开川lllllllllllllIIlI$。．．。，，WF2810964学校代码10601。。。1编号Y1001025弘区警吃NMEDICALUNIVERSITY硕士学位论文人亲磷脂酸磷脂酶A113亚型基因的克隆与序列分析及真核表达载体的构建学科专业：病理学与病理生理学研究方向：分子病理学研究生姓名：班亚珂学号：Y1001025学位类型：科学学位导师姓名刘永明教授：苏何玲副教授二。一三年六月独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，

2、论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得(注；如遗查墓他盂要挂型直咽的!丕拦亘窒2或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解桂林医学院有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权桂林医学院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文

3、。同时授权中国学术期刊(光盘版)电子杂志社、中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》、《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位做作者虢砷蓼可签字日期：钞1)年f月妇日导师签字：二洌以签字日期：加，多年∥月3日目录人亲磷脂酸磷脂酶A1p亚型基因的克隆与序列分析及真核表达载体的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1ABSTRACT

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3英汉缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7日IJ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯112结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．353讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．49综述⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．56攻读学位期间发表的学术论录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．71致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．72人亲磷脂酸磷脂酶A1B亚型基因的克隆与序列分析及真核表达载体的构建中文摘要目的克隆人亲磷脂酸磷脂酶A1(PA．PLAl)p亚型基因，分析该酶基因及其蛋白质的序列特征，构建PA．PLAlp亚型基因真核表达载体，为该酶生理功能的研究提供实验依据。方法从人的肾脏组织中提取总RNA，逆转录制备cDNA，扩增人PA．PLAlp亚型基因并克隆测序。以VectorNT

6、I8．0、DNASTAR、ORFfinder分析所克隆的人PA．PLAlp亚型基因及其蛋白质序列。构建真核表达载体pcDNA3．1．PA—PLAl(p亚型)，测序证实后转染小鼠分泌胰岛素细胞株MIN6，以Westemblot检测PA．PLAI[3亚型蛋白的表达水平。结果人PA．PLAlp亚型基因训5ⅢA全长为2938bp，编码区长2121bp，编码一个由608个氨基酸残基组成的蛋白多肽，分子量为83141道尔顿，等电点为5．64。序列比对表明所克隆的人PA．PLAlp亚型基因与牛PA．PLAl基因同源，并与KIAA0725蛋白及P1

7、25蛋白高度相似。系统发生分析结果显示PA．PLAlp亚型与KIAA0725蛋白及P125蛋白在脂肪酶基因家族中形成亚家族。测序结果证实所构建的真核表达载体正确，Westernblot检测表明该表达载体可在MIN6细胞中过表达PA．PLAl蛋白。结论所克隆的人PA．PLAlp亚型为已经报道的牛PA．PLAl的同源基因，与KIAA0725蛋白及P125蛋白高度相似，均为细胞内磷脂酶。所构建的PA．PLAlp亚型基因真核表达载体能在MIN6细胞中过表达PA—PLAl蛋白。关键词克隆；亲磷脂酸磷脂酶A1p亚型；真核表达载体；序列分析Clo

8、ningandSequenceAnalysisofHumanPhosphatidicAcid—preferringPhospholipaseA1pSubtypeGeneandConstructionoftheEukaryocyteEx