两株滨海植物内生真菌次级代谢产物及其抗肿瘤活性研究

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1、谨以此论文献给------------------李丹两株滨海植物内生真菌次级代谢产物及其抗肿瘤活性研究学位论文答辩日期：指导教师签字：答辩委员会成员签字：独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得（注：如没有其他需要特别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月

2、日---------------------------------------------------------------------学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意以下事项：1、学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。2、学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学“中国学术期刊(光盘版)电子杂志社”用于出版和编入CNKI《中国知识资源总库》，授权中

3、国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：签字日期：年月日签字日期：年月日两株滨海植物内生真菌次级代谢产物及其抗肿瘤活性研究摘要微生物是发现新型药物先导结构的重要资源，但是陆源微生物天然产物结构的重复发现问题已经日益突出；海洋来源微生物由于高压力、高盐度等因素使得其次级代谢产物化学结构与生物活性具更好的新颖性和多样性，而滨海地区作为海洋与陆地的交界带，其微生物资源既具有前述两者的共同特征，又有不同于两者的性质。本论文对滨海地区的植物样品进行微

4、生物分离培养，并结合抗肿瘤筛选和化学分析筛选，选取了2株植物内生真菌进行深入的次级代谢产物结构分析和活性评价。实验内容包括：滨海植物来源微生物分离纯化；微生物的初筛和目标微生物的复筛；目标微生物的发酵条件摸索、优化及发酵；发酵液的提取，单体化合物的分离、纯化、结构鉴定、衍生化以及部分化合物初步抗肿瘤活性测定。本研究从对广西来源的12个红树林植物样品（杨叶肖槿、黄槿、木榄、红海榄、海漆、桐花树、无瓣海桑、白骨壤、水黄皮、秋茄、海芒果、榄李）和其它3个滨海植物样品（青岛滨海植物样品2个，东营滨海盐地碱蓬植物样品1个）进行微生物的分离纯

5、化，共得到真菌菌株147株，对这147株真菌进行了抗肿瘤活性的初筛和复筛，得到具有抑制细胞增殖活性的菌株8株，对这8株微生物菌株进行了HPLC分析，选取其中2株菌作为下步研究的目标菌株，它们的共同特征为：HPLC指纹图谱中含有紫外相似的系列吸收峰，出峰时间在30-45分钟之间，这些特征表明这2株菌的次级代谢产物中同系物丰富，具有中等极性。通过对各种发酵条件下浸膏的TLC薄层点板、HPLC指纹图谱、抗肿瘤活性筛选和浸膏产量的综合考虑，确定了目标菌株最优的发酵时间，培养基以及培养方式。采用各种分离提取方法，从青霉属真菌LD-68中分离

6、得到7个化合物，并对化合物1进行了结构衍生化获得7个化合物；从桔青霉真菌LD-11中分离得到20个化合物；从两株真菌中共获得34个化合物的结构类型包括弯孢霉菌素类化合物、杂肟环化合物、桔霉素类化合物、苯的衍生物等。用MTT法对化合物1-5、8-18进行了抗肿瘤活性测定，表明化合物2~5、18对A549和K562细胞具有中等抑制活性，而化合物2-5对Hela细胞具有较强的抑制作用，其IC50值分别为3.99、7.75、10.00和5.10μΜ。综上，本文从滨海来源植物中分离内生真菌147株，并选取2株进行系统研究，在其次级代谢产物中

7、分离出化合物34个，阐明了全部化合物的结构，发现了2个新化合物，都为桔霉素类化合物。本研究为海洋天然产物化学提供了新化合物；发现了具有新的抗肿瘤细胞活性的系列化合物，为抗肿瘤天然产物的研究奠定了基础。关键词：滨海植物内生真菌；次级代谢产物；抗肿瘤活性SecondarymetabolitesandtheirantitumoractivitiesoftwocoastalplantsendophyticfungiAbstractMicrobeareimportantresourcestodiscoverneotypedrugleader

8、structure,howeverrepetitionproblemsinnatureproductstructureofland-derivedmicroorganismaremoreandmorewitheachpassingday.Dueto