肺炎支原体脂质相关膜蛋白诱导人支气管上皮细胞splunc 1表达的变化

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1、分类号学校代码密级学号200922024024肺炎支原体脂质相关膜蛋白诱导人支气管上皮细胞SPLUNC1表达的变化TheChangesofExpressionofSPLU咐C1InducedbyMycoplasmapneumoniaelipid．associatedmenlbraneproteinsinHumanBronchialEpithelialCells指导教师姓名、职称盟叠上皇圭堡匡盟湖南师范大学学位评定委员会办公室2013年04月摘要目的：观察不同浓度肺炎支原体脂质相关膜蛋白(Mycoplasmapne硼∞niaelip

2、id．associatedmembraneproteins，MP—L舢V口s)在不同时间点对人支气管上皮细胞(印强Cs)短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆l(ShortPalateLungandNasalepitheliumClone1，SPLUNC1)表达的影响，探讨SPLUNC1在呼吸道感染中的作用及其表达与肺炎支原体感染的时效关系和量效关系。方法：①通过间接免疫荧光法观察SPLU蛇1蛋白在HBECs细胞内定位；②不同浓度Ⅷ一L觚口s(O．1、O．5、1．O、5．O“斯儿)刺激}玎3ECs后，通过实时荧光定量FQ—PCR法检测不同时间

3、点(2h、4h、8h、16h及24h)SPLUNC1基因表达；同时用0．5毗MP-Lp山口s诱导船ECs不同时间点通过westem．blotting法检测SPLUNC1蛋白的表达。⑨MTT法检测不同浓度的MP．L舢vⅢs和LPS对}玎3ECs细胞增殖的影响，找出对船ECs细胞增殖影响相似的MP．LAMPs与LPS浓度，比较MP．L』6山伊s与LPS刺激皿ECs后，SPLUNC1基因表达的差异。结果：①SPLUNC1蛋白主要分布于细胞胞浆中。②在相同时间点，不同浓度的MP．L-6山ms能诱导SPLUNC1表达上调，其中0．5舭Ⅷ一L

4、触汩s浓度组SPLUNC1基因表达量最显著，不同浓度组间两两比较差异有统计学意义(P<0．01)；在同一浓度组，御．L龇洄s刺激细胞2h后SPLm屹l基因及蛋白表达量开始上调，并在4h时达高峰，随着时间延长逐渐下降，不同时间组两两比较差异有统计学意义妒<0．01)。③与MP．L√址佃s刺激细胞后24h内SPLUNC1基因表达先增高后降低不同，LPS刺激细胞后同时间内SPLUNC1基因表达呈持续增高趋势。结论：①MP．L舢Ⅲ，s能诱导船ECs中的SPLUNC1基因和蛋白表达上调，并存在一定的时间和剂量依耐性，其表达量最佳浓度和时间点

5、为0．5舭Ⅷ．L』6山口s刺激如BECs后4h。②不同浓度的Ⅷ．L√心口sLPS刺激细胞后，24h内SPLU屺1基因表达变化趋势不同。关键词：肺炎支原体；脂质相关膜蛋白；短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1；脂多糖；人支气管上皮细胞ⅡABSTRACTObjectiVe：ToobsenrememRNAa11dproteillexpressionsofShortPalateLullga工ldNasal印itlleliuIIlClone1(SPLUNC1)atdifferentthepomsaRerbeillgmducedbydi恐rentco

6、ncen缸．ation卜匆coplasmapneumoniauelipid-associatedmembmeproteins(Ⅷ-LAⅣⅢs)i11humanbroncllialepithelialcells(}玎3ECs)，andtoexploret11er01eofSPLU叱1inrespirat0巧tractinfectionaIldtlletime—effectanddose—ef五：ctontheexpressionofSPLUNC1inducedbyl衄-LA1唧s．Metllods：①Indirectimmlmofl

7、uorescenceassaywasusedt0a11alyzemesubcellular10cationofSPLUNC1proteini11耶ECs．②}IumallbronchialepithelialcellswerestimulatedwitIldifrerentconcemrationsofⅣ衅-LAⅣ田s(0．1，0．5，1．O，5．0Ⅲ；／rnL)a11dLPS(0．01、0．1、1．0、10鹏咖也)．，nlemRNAexpressionofSPLUNC1atdi仃erenttimepoints(2，4，8，16，

8、24h)aRerbeingstimulatedwasdeteminedbyreal．timenuorescemqu鲫【tita：tiVereVersetranscription—polymerasechainreaction(FQ-PCR)．Dif