elmo1对巨噬细胞的吞噬作用及炎症反应中相关因子表达的影响

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1、单位代码10476学号1204180336分类号Q254河為鉀私七寒硕士学位论文ELMOl对巨噬细胞的吞噬作用及炎症反应中相关因子表达的影晌学科、专业：生物学、细胞生物学研究方向：细胞迁移申请学位类别：理学硕士申请人：刘慧兵指导老师：杨军英副教授二〇一五年五月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研宄成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得河南师范大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一

2、同工作的同志对本研宄所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。作者签名:—日期：佩」丫关于论文使用授权的说明本人完全了解河南师范大学有关保留、使用学位论文的规定，g卩：有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权河南师范大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）作者签名：导师签名：曰期:奶mEFFECTSOFELMO1ONTHEEXPRESSIONOFI

3、NFLAMMATION-RELATEDCYTOKINESANDPHAGOCYTOSISINMACROPHAGEADissertationSubmittedtotheGraduateSchoolofHenanNormalUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceByLiuHuibingSupervisor:Dr.YangJunyingMay,2015摘要ELMO1（Engulfmentandcellmot

4、ilityprotein1，ELMO1）基因位于人第七号染色体上，在小鼠细胞内定位在第十三号染色体，编码的ELMO1蛋白在细胞的迁移和吞噬过程中扮演着重要的角色，失控的细胞迁移和吞噬会导致炎症相关疾病的发生甚至肿瘤转移。巨噬细胞由来源于骨髓的单核细胞分化而来，机体所有组织中都有这种细胞的存在，且它还是造血系统中可塑性最强的一种免疫细胞。巨噬细胞既是机体非特异性免疫的重要组成细胞，也在特异性免疫反应中有着呈递抗原的作用，是体内一种具有多种功能和用途的细胞，这些多样性功能赋予它在正常发育、体内平衡、组织修复和对病原

5、菌的免疫反应中有不同作用。在非特异性免疫中，它能通过吞噬作用除去机体中侵入的病原菌和死细胞以及碎片；在特异性免疫反应中摄取并递呈外援性异物，通过分泌细胞因子和趋化因子诱导和调节免疫应答。几乎每一种人类疾病都涉及到巨噬细胞，它们也被作为主要的治疗目标，因为它们的这些多样性功能可以被定向的加强或抑制，以改变疾病的结果。LPS刺激巨噬细胞后，通过TLR4受体激活调控细胞内炎症因子相关基因的表达。ELMO1基因参与细胞的迁移和吞噬作用，而巨噬细胞在机体的固有免疫和适应性免疫中发挥重要作用，为了探究ELMO1是否可以调节

6、巨噬细胞的吞噬作用和分泌功能，以及涉及到哪些分子机制。首先，实验室通过构建了ELMO1基因的干涉载体PLVX-shRNA及其对照质粒，包被慢病毒后感染RAW264.7细胞系，扩大培养后用流式细胞仪分选出稳定表达的细胞系，采用镜下观察细胞形态，然后用稳定表达细胞系的细胞去吞噬标记荧光标签的大肠杆菌颗粒，流式细胞仪分析吞噬效率。然后，本实验室成功建立ELMO1基因敲除小鼠，从小鼠腹腔取得原代巨噬细胞或者由小鼠骨髓细胞诱导分化而来的巨噬细胞先用流式细胞仪检测纯度或分化效率，再通过吞噬指数法去检测野生型和敲除型吞噬效率

7、，并从蛋白水平检测LPS刺激后炎症因子的表达情况。结果表明：ELMO1基因表达降低后细胞的吞噬能力变弱；在小鼠的原代巨噬细胞中，敲除型细胞内Dock2表达明显降低，细胞的吞噬能力无明显变化，可能是由于ELMO1敲除后细胞内ELMO蛋白的另一种亚型ELMO2蛋白表达升高引起的。LPS刺激巨噬细胞后，炎症因子TNF-a和IL-6的分泌在统计学上无显著性差异，但由实验结果可知ELMO1敲除后炎症因子产生的绝对量相对增加。ELMO1基因在巨噬细胞内与Dock2结合形成复合物行使功能，ELMO对原代巨噬细胞的吞噬影响有待

8、进一步验证。I关键词：ELMO1，RAW264.7细胞，原代巨噬细胞，吞噬作用，炎症因子IIABSTRACTELMO1geneislocatedonchromosomenumberseveninhumans,andthegeneispositionedonchromosomenumberthirteeninmice,thisgeneencodedELMO1proteinwhichpla