穿心莲内酯对巨噬细胞炎症因子表达的影响的论文

《穿心莲内酯对巨噬细胞炎症因子表达的影响的论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

　　穿心莲内酯对巨噬细胞炎症因子表达的影响的论文作者：李明,陈伟强,胡太平,张丽蓉,蔡尤彪,古宏标【摘要】目的研究穿心莲内酯对小鼠巨噬细胞氧化亚氮(no)、肿瘤坏死因子(tnfα)和白细胞介素6(il6)生成的影响。方法培养小鼠巨噬细胞ral)和不同浓度的穿心莲内酯(终浓度1、10、50μmol/l)进行干预，并设空白组和穿心莲内酯单独作用组作为对照。取培养24h细胞上清，用griess法检测no产量;用elisa法检测tnfα、il6浓度。结果与空白组比较，lps明显促进了ramationfactorssecretioninmacrophagecells.methodsamacrophagecelllineramatoryfactornitricoxide(no),tumornecrosisfactorα(tnfα)andinterleukin6(il6)inthesupernatanteasuredbygriessreagentandelisa,respectively.resultsafterstimulatedarkedlyupregulated.pretreatedmationfactorsexpressionlevels,ighteffectivelyblocksinflammationbydoacrophagecells;inflammationfactor;lipopolysaccharide　　目前，炎症在心血管疾病、肿瘤中的促进作用日渐受到重视，抑制炎症反应防治心血管疾病及肿瘤成为研究的重点[1-2]。.cOm穿心莲为爵床科植物穿心莲属植物穿心莲干燥地上部分，作为常用中药，具有清热解毒、凉血消肿等功效。穿心莲内酯是穿心莲的主要药效成分，有研究表明，穿心莲内酯有显著的抗炎活性，能抑制二甲苯和醋酸所致的小鼠毛细血管通透性增加，还对大鼠蛋清蛋白、角叉菜胶足趾注射致炎模型有明显的抗炎作用[3]。炎症反应时，巨噬细胞在细菌及其内毒素的刺激下，分泌大量的炎症因子，如氧化亚氮(no)、tnfα和il1β等，这些炎症因子又可以进一步活化巨噬细胞，形成恶性循环，加重炎症反应。本研究通过观察穿心莲内酯对no、tnfα和il1β等炎症因子表达的影响，探讨其抗炎活性。　　1材料与方法　　1.1试剂与仪器　　穿心莲内酯(四川广汉市维康植化有限公司);细菌内毒素(lps，e coliserotype055:b5，美国sigma公司);no检测试剂盒(南京建成生物公司);tnfα、il6elisa检测试剂盒(美国rd公司);胎牛血清(杭州四季青公司);dmem培养基(美国gibco公司);酶标仪(美国biorad公司)。　　1.2细胞培养及干预实验　　小鼠巨噬细胞raem培养基(含体积分数10%胎牛血清、质量浓度100u/ml青霉素和100μg/ml链霉素)，体积分数5%co2，37℃条件下传代培养。取生长状态良好的raem培养基调整细胞浓度为1×106/ml，接种到24孔培养板内，待细胞生长至80%融合后，加入不同浓度的穿心莲内酯(终浓度分别为1、10、50μmol/l)孵育1h，然后加入lps(终质量浓度1μg/ml)进行刺激。实验分组：正常对照组、穿心莲内酯单独作用组、lps组和穿心莲内酯加lps组。　　1.3no浓度测定　　细胞加入刺激物后培养24h，收集各处理组细胞培养上清液，用硝酸还原酶法检测炎性介质no的浓度。操作步骤按试剂盒说明书完成。　　1.4细胞因子浓度测定　　细胞加入刺激物后继续培养24h，收集各处理组细胞培养上清液，用tnfα和il6elisa试剂盒检测上清液中细胞因子的含量。操作步骤按试剂盒说明书完成。　　1.5统计分析　　所有数据以±s表示，采用spss11.0统计软件对实验结果进行student’st检验，p<0.05为差异有显著性。　　2结果　　2.1穿心莲内酯对lps诱导巨噬细胞no生成的影响　　收集24h细胞培养上清，用griess法测定细胞上清中no的含量。结果见表1。结果显示，50μ mol/l穿心莲内酯单独作用并不影响巨噬细胞no的表达(与正常对照组比较，p>0.05);1μg/mllps刺激可以显著诱导巨噬细胞raol/l浓度范围内呈剂量依赖性。表1穿心莲内酯对no分泌的影响　　2.2穿心莲内酯对lps诱导巨噬细胞tnfα、il6生成的影响　　结果见表2。elisa检测结果显示，在正常情况下巨噬细胞raol/l浓度的穿心莲内酯单独作用对其表达也无明显影响(与正常对照组比较，p>0.05)。当用1μg/mllps刺激后，巨噬细胞tnfα和il6的表达均明显增高，与正常对照组比较，p<0.01。用穿心莲内酯预处理能够抑制lps诱导的炎症反应，穿心莲内酯各处理组tnfα、il6浓度均明显低于lps组，两者比较差异有显著性。　　3讨论　　近年来，炎症在多种疾病中，尤其是心血管疾病和肿瘤中的作用引起了广泛的关注。根据在动脉粥样硬化斑块有多种炎性细胞和炎症因子存在等证据，ross明确提出了动脉粥样硬化(atherosclerosis，as)的“炎症学说”，指出慢性炎症反应是as的主要发病机制[4]。随后的研究证实，进入血管壁的巨噬细胞可被氧化型低密度脂蛋白、革兰阴性菌及其lps活化，通过nfκb、inos和cox等途径产生tnfα、il6、no、pgs等多种炎症介质，促进as斑块的形成和发展，而抑制炎症反应可改善as病变程度，进一步说明了炎症在as中的关键性作用[5]。炎症与肿瘤的关系很早就引起了人们的关注。现代研究认为，炎症细胞主要通过分泌il1、il6、tnfα、no、pgs及活性氧等炎症因子，参与组成肿瘤微环境，影响肿瘤的进程。这些炎症因子不仅能诱导正常细胞的恶性病变，还可以促进肿瘤细胞增殖，抑制细胞凋亡，诱导肿瘤血管形成，在肿瘤发生发展中有重要作用[6]。2009年，mantovani在nature杂志上提出，与无限制性生长、转移等特征一样，炎症性微环境与肿瘤关系密切，并认为炎症是肿瘤的7大重要标志之一[2]。　表2穿心莲内酯对tnfα和il6表达的影响 　　与正常对照组比较：**p<0.01;与lps组比较：#p<0.05，##p<0.01目前，国内外研究者都在积极寻找抗炎药物，对心血管疾病和肿瘤进行防治研究工作[1,7-8]。我国传统中药，尤其是清热解毒中药很多具有抗炎作用，发挥中药资源在抗炎症方面的优势，寻找有效的抗炎中药，防治危害人类健康的重大疾病是中药现代化开发的需要。穿心莲内酯是清热解毒代表中药穿心莲的主要药效成分。以往研究证实，穿心莲内酯有显著的抗炎活性，能抑制二甲苯和醋酸所致的小鼠毛细血管通透性增加，还对大鼠蛋清蛋白、角叉菜胶足趾注射致炎模型有明显的抗炎作用[3]，但对其细胞及分子机制并不清楚。本研究以穿心莲内酯为研究对象，初步观察了其对炎症因子no、tnfα和il6表达的影响。实验结果显示，lps刺激可以诱导巨噬细胞大量表达炎症因子no、tnfα和il6，而穿心莲内酯预处理则可以减轻lps引起的炎症反应，减少巨噬细胞炎症因子的表达。有研究显示穿心莲内酯可以阻碍nfκb与dna的结合，抑制nfκb下游基因的转录[9]。inos、tnfα、il6等基因的表达都受到nfκb的调控，因此推测穿心莲内酯抑制炎症因子表达可能与降低nfκb信号分子活性有关。本研究结果显示，穿心莲内酯能降低lps诱导的巨噬细胞炎症因子no、tnfα和il6生成，抑制炎症反应，为穿心莲内酯应用于动脉粥样硬化、肿瘤等炎症相关性疾病的治疗提供了理论基础。【参考文献】　[1]vanderheidenk,cuhlmanns,luonglea,etal.roleofnuclearfactorkappabincardiovascularhealthanddisease[j].clinsci(lond),2010,118(10):593-605.　　[2]mantovania.cancer:inflamingmetastasis[j].nature,2009,457(7225):36-37.　　[3]何恩其,赵烽.穿心莲的药理作用及其研究进展[j].中医药导报,2007,13(50)：107-108　　[4]rossr.atherosclerosisisaninflammatorydisease[j].amheartj,1999,138(5pt2):s419-s420.　　[5]mahmoudim,cuizenn,gallagherpj.atherogenesis:theroleofinflammationandinfection[j].histopathology,2007,50(5):535-546.　　[6]cleversh.atthecrossroadsofinflammationandcancer[j]. cell,2004,118(6):671-674.　　[7]leech,jeonyt,kimsh,etal.nfkappabasapotentialmoleculartargetforcancertherapy[j].biofactors,2007,29(1):19-35.　　[8]baudv,karinm.isnfkappabagoodtargetforcancertherapy?hopesandpitfalls[j].natrevdrugdiscov,2009,8(1):33-40.　　[9]hidalgoma,romeroa,figueroaj,etal.andrographolideinterferesacol,2005,144(5):680-686.