登革病毒包膜edⅲ蛋白中和抗体结合表位筛选与鉴定

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1、分类号密级ＵＤＣ编号硕去学位论文登革病毒包膜ＥＤＩ凸蛋白中和抗体结合表位厮选与鉴定＊Ｓｃｉｅｅｎ化ｇａｎｄＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＥｉｔｏ货ＲｅｃｏｎｉｚｅｄｂｙＮｅｕｔｒａ化ｉｎｇｐｐｇＡｎｔｉｂｏｄｉ伪ａｇａｉｎｓｔＥｎｖｅｌｏｐｅＰｒｏ似ｎＤｏｍａｉ田田ｏｆＤｅｎｇｕｅＶｉｒｕｓ易海粟、车小ｊｊ研究员导师姓名吴玉章教巧Ｉ专化名巧化床洽验谗巧学巧巧类型学术型论文巧交日期２０巧年３月南方医科大学２０１２级硕击学位论文登革病毒包膜

2、ＥＤＩＩＩ蛋白中和抗体结合表位筛选及鉴定ＳｃｒｅｅｎｉｎｇａｎｄＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＥｐｉｔｏｐｅｓＲｅｃｏｇｎｉｚｅｄｂｙＮｅｕｔｒａｌｉｚｉｎ乂ｎ村ｂｏｄｉｅｓａｇａｉｎｓｔＥｎｖｅｌｏｐｅＰｒｏｔｅｉｎＤｏｍａｉｎｇ虹ｏｆＤｅｎｕｅＶｉｒｕｓｇ＂课题来源：国家自然科学基金联合基金（重点）项目登革病毒抗＂体介导保护性免疫应答的分子机制（编号：Ｕ１１３２００２）；＂国家自然科学基金项目四种血清型登革病毒包膜蛋白阻。区保护性抗原表位的研究（编号：８１２０１２９６）学位申请人易海粟

3、导师姓；ｇ吴玉章、车小燕ＩＩ专业若称Ｉ店床栓验诊断学培养类型学术型培养层次硕击研究生所在学院第二临床医学膝答辩委主席富宁答辩委成员赵卫裘宇容陈茶温巧荣２（＾５年３月２０日广州硕壬学位论文登革病毒包膜ＥＤＩＩＩ蛋白中和抗体结合表位締选及鉴定硕：ｔ研究生：易海粟指导教师：吴玉章教授车小满研究员摘要登革热（Ｄｅｎｇｕｅｆｅｖｅｒ，ＤＦ）是由登革病毒（Ｄｅｎｇｕｅｖｉｒｕｓ，ＤＥＮＶ）感染一所引起的种虫媒传染性疾病，轻者主要引起无症状感染或者产生轻

4、微的症状，严重者可导致发生登革出血热（Ｄｅｎｇｕｅｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃｆｅｖｅｒ，ＤＨＦ）和登革休克综合征（Ｄｅｎｇｕｅｓｈｏｃｋｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＤＳＳ）。ＷＨＯ２０１４年２月发布的报告称登革热为全球蔓延最快的病媒传播疾病，发病数量在过去５０年间增加了约３０倍。已构成美洲、东南亚、西太平洋地区的严重的健康问题和经济负担。２０１４年，登革热在我国南方（主要是广东省）再次发生大流行，仅广东省累积报告登革热病例超过４５０００例，再次敲响了防治登革热的警钟。。在目前尚无登革特异性治疗药物批准的情况下，

5、登革疫苗的研发愈发重要目前有数个登革疫苗正在进行临床试验一阻期临，仅有种疫苗通过床试验，但此疫苗对不同血清型登革病毒保护性差异较大，尤其对２型登革病毒几乎无保护作用。鉴于登革病毒多种血清型及其致病机制的复杂性，尤其二次感染异型登革病毒所产生的抗体增强作用（ＡＤＥ）更是成为疫苗研发的重要擊肘。登革病毒属于黄病毒家族，为有包膜的单正链ＲＮＡ病毒，包括四种不同的血清型，基因组长度约１化ｂ，编码三种结构蛋白（Ｃ，衣壳蛋白；Ｍ，膜蛋白；Ｅ，包膜蛋白）及７种非结构蛋白（ＮＳ１、ＮＳ２ａ、ＮＳ２ｂ、ＮＳ３、ＮＳ４ａ、ＮＳ４ｂ和Ｉ

6、摘要ＮＳ５）。其中，由于Ｅ蛋白暴露在病毒表面，是诱导登革病毒中和抗体产生的主要蛋白，也是与疫苗研究相关的主要蛋白；非结构蛋白参与登革病毒生活周期的重要环节，相关研究主要用于体外诊断试剂的研发上。Ｅ蛋白含有３个功能区，Ｉ区化ＤＩ）位于中也ＩＩ区化ＤＩＩ）位于侧面，含融合环；阻区化Ｄｉｌｉ）呈免疫球蛋白样折叠，被认为能够与细胞表面受体结合及中和抗体的主要靴点，登革热疫苗研究的範标也多集中于ＥＤ曲蛋白。研究表明，从感染登革病毒患者体内分离的登革病毒抗体中含有交叉反应性及型特异性ＥＤＩＩＩ抗体ｅｒｏ，且抗登

7、革病毒诸多成分的抗体中，ＥＤＩＩＩ抗体在Ｖ细胞感染模型中具有最强的中和活性。重组ＥＤＩＩＩ蛋白鼠源单抗亦具有体内外中和作用。己经证实去除登革病毒感染患者恢复期血清中ＥＤＩＩＩ抗体并不改变该血清的中和作用及ＡＤＥ作用，可能原因为患者血清中抗ＥＤｍ抗体含量低，在整个血清保护作用中占的比例较低。但是如能够促进患者体内ＥＤＩＩＩ抗体的产生并达到有效浓度，ＥＤＩＩＩ抗体很可能具有强大的中和保护作用，因而具备作为治疗性抗体的潜能。而患者体内ＥＤ阻抗体产生较少的直接原因可能是作为一登革病毒多种抗原成份之的ＥＤＩＩＩ蛋白在自然感染的抗

8、原竞争中处于劣势，从而不能诱导有效的抗体反应。因此解析ＥＤＩＩＩ蛋白中和表位，进而制备亚单位疫苗避免多种成份的抗原竞争仍是重要的疫苗研发策略，亦是本研究的切