迟缓爱德华氏菌效应物的鉴定及初步功能评价

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1、洗巧每学０３０１２０９３９卿工导：Ｐ１还论文■迟缓爱德华氏菌效应物的鉴定及初步ｇｇ目．ｊ＾＾功能评价生物化王；学科专业研究方向．微生物和分子生物学论文作者：莖垄璧刘琴教授指导教师；２０巧年０９０１定稿日期；月日学位论文使用授权声明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华东理工大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ

2、采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密论文在解密后遵守此规定。论文涉密情况：回／不保密□保密，保密期（年月日至年＿月日）＿＿＿＿＿学位论文作者签名；指导老师签名：／日期：批杉年月日日期：如杉年！口月ｙ日分类号：ＱＷ乂９密级：ＵＤＣ：华东理工大学学位论文迟缓爱德华氏菌效应物的鉴定及巧步功能评价黄亚巧指导教师姓名：刘琴教授华东理工大学生物工程学院申请学位级别：硕壬专业名称：生物化工．０１论文答辩日期．．论文定稿日期；２０１

3、５．０９：２０１５１０１５学位授予单位：华东理工大学学位授予日期：答辩委员会主席：张元兴教授评闽人；王启要教授陈波研究员作者声明我郑重声明：本人恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的结果。除了文中明确注明和引用的内容外，本文不包含任何他人己经发表或撰写过的内容。论文为本人亲自撰写，并对所写内容负责。论文作者签名：年〇月Ｖ日（（华东理工大学硕±学位论文第Ｉ页迟缓爱德华氏菌效应物的鉴定及初步功能评价摘

4、要’？ｅ化一迟缓爱德华氏菌阳油成ｚＩ化ｎ虹）是种重要的水产养殖病原菌，可引发海水鱼类患腹水病、败血症等，造成重大损失。本实验室从先期感染爱德华氏菌的大菱解上分离获得强毒株Ｅ曲２０２，并通过转录纪学研究及其他筛选策略筛选出２５个候选效应物。本文着重对其中４个效应物ＥＴＡＥ０８６６、ＥＴＡＥ１７巧、ＥＴＡＥ２１８６和ＥＴＡＥ２４２８进行＿＿＿＿了分泌和转运特性分析，并考察了它们在细菌黏附、内化及斑马鱼毒力方面的作用。首先－，构建了表达效应物Ｐ内醜胺酶誕合蛋白的质粒，转入Ｅｆｉ２０２、ＡＴ３ＳＳ、Ａ

5、Ｔ６ＳＳ苗株中获得一系列重组菌株。利用胞外分泌蛋白免疫印迹分析、巧光能量共振转移ＦＲＥＴ（），鉴定出ＥＴＡＥ０８６６和ＥＴＡＥＪ７５７依赖于Ｈ型分泌系统Ｔ３ＳＳ进行分泌转运，＿（）ＥＴＡＥ－２１％依赖于Ｔ３ＳＳ转运，而ＥＴＡＥ—２４２８则依赖于六型分泌系统（Ｔ能句进行分泌和转运。利用免疫巧光技术和细胞质膜組分蛋白免疫印迹，发现ＥＴＡＥ０８６６和＿ＥＴＡＥ＿２４２８转运到细胞内后主要定位于细胞膜组分中，ＥＴＡＥ＿２１８６定位于细胞质组分。中，而ＥＴＡＥ１７５７则可能定位于细胞核中上述研究综合分析

6、并确定了４个５曲２０２的＿效应物的分泌转运特性及胞内定位情况。其次，分别构建了上述效应物的单基因缺失株Ａ０８６６、Ａ１７５７、Ａ２１８６和Ａ２４２８并利用细胞模型比较了缺失株在细胞黏附、内化和増殖方面与巧生株的差异。结果表明，Ａ２４２８在非吞随细胞感染模型上具有显著増强的黏附、内化的能力，同时Ａ２４２８在巨礎细胞感染后期的增殖能力显著增强。随后，在斑马鱼模型上进行攻毒试验，发现Ａ２４２８具有更好的减毒效果，表明ＥＴＡＥ２４２８在ＥＩＢ２０２的毒力机制中扮演着非常重要的角色。＿最后，对上述

7、４个效应物进行了表达和纯化，并成功获得ＥＴＡＥ２４２８纯化样品，＿为该效应物的结构和功能研究奠定了基础。上述工作对进一步探究迟缓爱德华氏菌Ｔ３ＳＳ和Ｔ６ＳＳ效应物的功能及其与宿主细胞之间的相互作用机制奠定了基础。关键词：迟缓爱德华氏菌；巧ＳＳ；Ｔ６ＳＳ；效应物第ｎ页华东理工大学硕±学位论文Ｉｄｅｎ村ｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＥｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａｔａｒｄａｅｆｆｅｃｔｏｒｓＥｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａｔａｒ

8、ｄａｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｂａｃｔｅｒｉｕｍｉｎｔｈｅａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅｏｆｅｃｏｎｏｍｉｃａｌｌｙｉｍｐｏｒｔａｎｔｆｉｓｈｓｐｅｃｉｅｓ．Ｉｔｓｉｎｆｅｃｔｉｏ打ｕｓｕａｌｌｙｌｅａｄｓ化ｈｕｇｅｌｏｓｓｅｓｄｕｅｔｏｔｈｅｏｕｔｂｒｅａｋｓｏｆｔｈｅｉｎ