松果菊苷诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化及作用机制研究

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1、学校代号１０１６２学号２０１２１０１０００１２戀遂《中Ｉ似若Ｌｉａｕ凸ｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌ仁ｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉ面ｅｇｙ＇＇ｉ－ｆｌ博±学位论文松果菊鲁诱导骨聽间充质干细胞向成胥细胞分化及作巧机制研究■？■－？．？．，．＇．．？Ｉ．？－．－＇＇．－：：，．学位申请人田原指导教师姓名秦书伶专处名说中西医结合基础申请学位类型学术学位论义提交日期二〇—五年千一月江宁中医药大学学位论文独创性与真实性声明

2、本人郑重声明一：在我呈交的学位论文中，本人经研究所得的数据、原理、结论等切内容均真实，且经本人认真核对无误；我呈交的与学位论文巧关的资料（原始记录、照片、录像片、检查化验报告单等）确为完整的学位论文研究中的原始资料，本人没作任柯修改：我呈交的学位论文是我本人在指导教师的指导下进行的研究工作及取得的硏究成果。除文中特别加标注和致谢的地方外．论文中没有其他人已经发表或撰写过的研究成果，其他人对我完成此论文的帮助Ｗ及对本硏究所做的任何贡献均已在论文中作了明确说明并表示谢意。我呈义的学位论文及与该论文相关的

3、资料若有不实之处一，本人承担切相关责任。学位论文作者篇名巧私Ｒ期：如化年月円关于学位论文使用授权的声明本人完全了解３１宁中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家荷关部口机构送义论文的印刷版和电子版，化许被查阅和借阅。本人授权宁中医药乂学Ｉ可Ｗ将本学化论文的全部或部分內容编入有关数掘库进巧检索＾，可心采用影印、缩印或巧化复印手段保存和汇编本学位论文。（保密论文在解密后应遵巧此规定）、马廣学位论文作者巧名、学位论文导师签名円彻／２？：Ｗ过年月＾円目录一、摘要中文

4、论著摘要１英文论著摘要７二、英文缩略语１９Ｈ、正文论文一松果菊巧促进骨髓间充质干细胞增殖的研究前胃２１材料与方法２２实验结果２７３０Ｗ论齡３３论文二松果菊昔诱导骨髓间充质干细胞成骨分化的研究前胃３４材料与方法３５实验Ｓ果３９４７讨论１Ｓ５论论文Ｈ松果菊巧诱导骨髓间充质干细胞成骨分化机制的研究前胃５２材料与方法５３实验结果５８讨论７４Ｓ７９论８０四、本研究创新性的自我评价五８１、参考

5、文献六、附录综述８８在学期间科研成绩１０５敢射１０６个人简介１０７辽宁中医药欠学２０１５届博去学位论文摘要中文论著摘要＂＂肾主骨为依据Ｐ－Ｓｍａｄ－Ｒｕｎｘ２目的：本研究Ｗ中医理论，从成骨分化的ＢＭ２信号途径出发，采用细胞培养、Ｅｌｉｓａ检测、免疫巧光细胞染色法、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ－和ＲＴＰＣＲ等多种技术方法，观察补肾中药肉巧蓉（传统补肾中药）中的活性成分松果菊昔含药血清诱导骨髓间充质干细胞（Ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，

6、ＢＭＳＣｓ）向成骨细胞分化的作用，并从细胞及分子水平揭示松果菊巧含药血清发挥诱导作用的机制一种新的诱导，为骨组织工程的种子细胞的来源提供剂，为ＢＭＳＣｓ在组织工程及骨折愈合及骨缺损修复方面的应用提供理论基础及相一一个新的思路关依据，也为松果菊巧的进步开发利用提供。材料与方法：一ＢＭＳＣｓ增殖的研究。１．第部分：松果菊昔促进制备松果菊昔含药血清。取Ｓ昨ＳＤ（Ｅｃｈｉｎａｃｏｓｉｄｅ，６０只级大鼠，采用随机数字表法分为正常组和松果菊昔ＥＣＨ）组（松果菊巧的浓度为４ｍｇ／ｍｌ，每只大。松果菊昔组给予

7、松果菊巧水溶液鼠每次灌胃１ｍｌ）灌胃，正常对照组给予等体积的生理盐水，两组每日均灌胃２１次，连续４ｄ。末次灌胃后用０％水合氯醒进行腹腔麻醉，用负压采血管从腹主动°脉采血，室温下使血液自然凝固，离也后分离出血清，经５６Ｃ水浴灭活３０ｍｉｎ，°－过滤除菌后分装到无菌的离也管中，８〇Ｃ冰箱保存。２．ＢＭＳＣｓ的分离培养。采‘用全骨髓贴壁筛选方法进行原代ＢＭＳＣｓ的分离，在３７Ｃ，含５％Ｃ化的饱和湿度３ｄ在倒置显微镜下观察，培养箱中培养。接种后第，见细胞贴壁后半量换液Ｗ后每２ｄ换液１次。原代培养１４ｄ时细胞

8、融合达８０％，进行传代培养。３．ＢＭＳＣｓ的鉴定Ｐ３代ＢＭＳＣｓ，接种在置有盖玻片的２４孔培养板内，培。取对数生长期的４ｄＤ。，。ｚ、ＣＤ、ＣＤ？的表达养箱中培养，每天更换培养基培养免疫巧光检测ＣｇｍＰ３ＢＭＳＣｓ４，．松果菊昔对ＢＭＳＣｓ增殖的影响代调整细胞浓