pm2.5对哮喘大鼠气道炎症的影响及机制研究

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1、分类号：R725.6学校代码：10062密级：学号:2012701001博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：PM2.5对哮喘大鼠气道炎症的影响及机制研究TITLE：EffectandmechanismofPM2.5onairwayinflammationinasthmaticrats一级学科：临床医学二级学科：儿科学论文作者：王雪艳指导教师：刘戈力教授天津医科大学研究生院二○一五年五月分类号：R725.6学校代码：10062密级：学号:2012701001学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学博士学位论

2、文DOCTORALDISSERTATION论文题目：PM2.5对哮喘大鼠气道炎症的影响及机制研究TITLE：EffectandmechanismofPM2.5onairwayinflammationinasthmaticrats一级学科：临床医学二级学科：儿科学论文作者：王雪艳指导教师：刘戈力教授天津医科大学研究生院二○一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同

3、工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打―√‖）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学博士学位论文中文摘要目的：研究细颗

4、粒物PM2.5对哮喘模型大鼠气道炎症的影响，观察PM2.5对NF-κB和ICAM-1表达的调控，进而探讨PM2.5促进炎症的可能机制。方法：1.使用PM采样器收集空气中PM2.5样本，样本洗脱后过滤，真空冷冻干燥后，用磷酸盐缓冲溶液配制PM2.5悬液。2.50只Wistar大鼠随机分组，共计5组：PM2.5高剂量组（0.24mg/次）、PM2.5中剂量组（0.16mg/次）、PM2.5低剂量组（0.08mg/次）、生理盐水对照组和正常对照组。模型大鼠予卵蛋白皮下和腹腔注射两次致敏，14天后再行卵蛋白雾化吸入连续14天，建立大鼠过敏性哮

5、喘模型。从雾化开始第1天，气管注入PM2.5悬液，每三天一次，共计5次，观察各组大鼠哮喘发作表现。雾化结束2天后取材，进行外周血白细胞计数和BALF嗜酸性粒细胞(EOS)计数，HE染色观察气道病理改变，ELISA试剂盒检测血清总IgE。3.应用MTS法观察PM2.5对RAW264.7细胞增殖的影响。RAW264.7细胞接种于培养板，8个复孔。分别加入PM2.5悬液终浓度为3.2、1.6、0.8、0.4、0.2mg/ml，培养24h后，4个复孔MTS法检测OD值观察不同浓度PM2.5对RAW264.7细胞增殖的影响。同时，提取另外4个复

6、孔培养液中的上清液，用ELISA方法检测IL-1β和TNF-α浓度。ELISA方法检测PM2.5对哮喘大鼠血清和BALF中IL-1β和TNF-α浓度的影响。4.应用RT-PCR(实时荧光定量PCR)和WesternBlot方法，观察PM2.5体外浓度为3.2、1.6、0.8mg/ml时对RAW264.7细胞ICAM-1和NF-κB的mRNA和蛋白表达的影响。应用实时荧光定量PCR和WesternBlot方法检测哮喘模型大鼠肺组织和脾组织，观察PM2.5的体内作用对ICAM-1和NF-κB的mRNA和蛋白表达的影响。结果：1.PM2.5

7、收集共计2.5g，磷酸盐缓冲溶液配置悬液100mg/ml，-20℃冷冻保存备用。2.成功建立大鼠哮喘模型。3.PM2.5高、中、低剂量（0.24、0.16、0.08mg/次）能够加重哮喘大鼠的哮喘I天津医科大学博士学位论文发作症状，PM2.5高剂量和中剂量能够明显增加外周血白细胞总数和BALF中EOS数量，与生理盐水对照组相比有统计学意义（P<0.05）,PM2.5高、中剂量组之间比较，没有统计学意义（P>0.05）；PM2.5高、中、低剂量能够增加气道内EOS、中性粒细胞和巨噬细胞等炎性细胞浸润，促进杯状细胞增生，促进小支气管粘膜水

8、肿等病理改变。PM2.5高剂量和中剂量能够增加哮喘大鼠血清中总IgE含量，与生理盐水对照组相比有统计学意义（P<0.05）,高、中剂量组之间比较，没有统计学意义（P>0.05）。4.PM2.5体外浓度为3.2-0.8mg