香蕉尖孢镰刀菌fpd1基因敲除与功能研究

《香蕉尖孢镰刀菌fpd1基因敲除与功能研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、s/0(k大營硕士学位论文题目香蕉尖孢镰刀菌基因敲除与功能研究作者王飞燕指导教师黄俊生研究员类另学术型专业农业生物技术时间：二〇一五年五月ConstructionandFunctionResearchofthefpdlgenedeletionmutantsofFusariumoxysporumf.sp.cubenseAThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementFortheMasterDegreeinAgronomyByWangFei-yanSupervisor:Major:Agriculturalbiot^hnologySub

2、mittedtime:May,2015海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明翻性声明本人郑《声明：所交的学位论文，足本人在导师的指导下，独立进行研宄断取得的成粜餘文中己经注明弓丨用的内容终，本论文不含任钶其他个人或集体发衣或撰过的作品或成果对本文的研究潋出《耍资献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明，本声明的法律结果由本人承担《论文作者签名：日斯：年月口日学位论文叛权使用授权说明本人笼全了‘海晴大学关于收集，保存，使用学位论文的规定，即，学校有辍保留并向国家有关部门或机构交论文的复印件和电子飯，允许论文彼《和借学校可以为存在馆除合作关系兄弟《校户提供文献传递顔务和交换嚴务》本人授权

3、海大学可以将本学位论文的全或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫鑼等复制手保存和汇编本学位论文》保密论文在解密后遴守此规定，论文作者导■名日期：少阱月对日一日期年：月本人已经认真高校学位论文全文数据库发布韋程”，两遂将本人学位论文提交丨高校学位论文全文数据库中全文发布，并可按“章程中親定享受相关权益同意论文提交后箝后：丰年：—年：年发布论文作者签名讀导师签名日期《年贫月日期抓摘要香蕉枯萎病是一种维管束系统毁灭性病害，是由尖孢镰刀菌古巴专化型引起的，危害香蕉的主要有号、号和号生理小种，其以破坏维管束的方式致香蕉植株枯萎死亡。香蕉枯萎病防治缺乏有效的方法，采用抗耐病品种和

4、生物防治是目前防治香蕉枯萎病比较有效的方法。然而人们对香蕉菌致病分子机制了解十分有限，这一定程度上阻碍了抗病育种的开展。因此加强致病机理研究十分必要，将为抗病育种提供理论指导。本研宂主要利用反向遗传学对的号生理小种编码氯离子电导蛋白的基因功能进行研究分析。通过对尖孢镰刀菌务力基因进行生物信息学分析，发现企力基因编码的蛋白质与氯离子电导蛋白具有的部分相似性，可能参与了在细胞肿胀过程中从胞质到细胞膜的转置。假定的蛋白质具有多蛋白质磷酸化位点，是一种具有不稳定性的亲水蛋白。根据香蕉枯萎病菌基因编号的上下游序列设计同源臂引物并进行扩增，构建了敲除载体。采用介导的原生质体转化方法转化野生型菌株，

5、通过特异验证引物鉴定转化子，获得个敲除突变体，即。该突变体携带潮霉素抗性基因和绿色焚光蛋白基因双标记。通过对基因敲除突变体表型观察，并与野生型比较，发现⋯基因敲除突变体的生长速率明显减慢，产孢量显著降低，气生菌丝减少，菌落贴紧培养基生长。此外，与野生型相比，办⑴基因敲除突变体对过氧化氢敏感性没有显著变化，对氯化钠的敏感性增强。芽胞杆菌抗性结果显示突变体敏感性增加，而且处理后突变体细胞壁溶解和原生质外泄，其对农药多菌灵和咪鲜胺敏感性没有明显变化，对照无透明圈。通过突变体和野生型在含有不同因子的培养基中生长，突变体在和培养基的生长速率明显比野生型慢。而在培养基中突变体生长更慢。在培养基中突

6、变体生长速率未有所恢复，这些结果表明敲除基因导致对细胞壁干扰剂更敏感，暗示基因可能参与细胞壁完整性维持和胁迫响应调控。在香蕉苗盆栽致病性测试实验中，和】菌株的发病指数为和，野生型菌株发病指数为，清水对照的发病指数仅。表明突变体致病力显著减弱。用突变体和野生型的毒素粗提物浸泡香蕉苗根部，结果显示均可导致香蕉苗褐化，表明基因突变体的毒素合成没有受影响。通过对突变体和野生型的分泌蛋白、细胞质和细胞壁蛋白含量进行分析，发现突变体的分泌蛋白含量和比野生型低约。而野生型细胞质蛋白含量仅，比突变体低约。细胞壁蛋白与考马斯亮蓝结合分析显示细胞壁含量为时，两突变体和野生型吸光值分别相差达和突变体的吸光值

7、明显低于野生型吸光值，因此说明突变体细胞壁蛋白少于野生型含量。将野生型和突变体两种菌株分泌蛋白进行电泳未检测到差异带。这些结果揭示弁力基因调控细胞壁合成和组织，影响分泌蛋白输出。通过对两个突变体的功能回复试验分析，回复互补突变体力的菌落形态已与野生型菌落相近，可生成大量气生菌丝，生长速率增加，远不同于基因缺失突变体菌落。另外对于香蕉的致病力约为，与野生型相近。综上所述，基因参与的生长发育、胁迫响应、致病性以及细胞壁完整性维持，这些研宄结果为揭示