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1、用基因枪介导法将水稻几丁质酶基因导入小麦应用与环境生物2004,10(4):421—424Cl^JApplEnvironBiol=ISSN1006.687X2o048-25用基因枪介导法将水稻几丁质酶基因导入小麦术郝建国李晶黄萱徐子勤贾敬芬一韩德俊赵宇玮(西北大学生命科学学院西安710069)(西北农林科技大学陕西杨陵712100)摘要利用PDS1000/~,基因枪将水稻几丁质酶基因导入小麦幼胚盾片愈伤组织.基因枪轰击后在含有50mL硫酸卡那霉素的培养基上经过多步骤筛选和分化,从5个小麦品种共80
2、0多个幼胚中获得了6株绿苗,对此6株绿苗进行了PCR和Southern杂交分析.结果表明,其中4株绿苗为转基因植株,转化率最高可达1.2%.图3表2参17关键词小麦;基因枪;水稻几丁质酶基因;转化CLCQ78:S512.1TRANSFERRINGRICECHITINASEGENEINTOWHEATVIAMICRoPRoJECTILEBoMBARDMENTHAOJianguo,LIJing,HUANGXuan,XUZiqin,JIAJingfen一,HANDejun&ZHAOYuwei(Sc
3、hoolofLSciences,NorthwestUniversity,Xihn710069,China)(.NorthwestSci—TechUniversityofAgricultureandForestry,Yangling,Shaanxi712100,China)AbstractRicechitinasegenewastransferredintoimmatureembryogeniecalliofwheatusingPDS1000/Heparticledeliverysystem.Aft
4、erbombardingimmatureembryogeniecalliofwheat,theseembryoswereselectedandgeneratedon50mg/Lkana—myeinecontainingmedium.Sixgreenplantswereregeneratedfromresistantcalliderivedfromabout800bombardedimmatureembryogenieeallifrom5wheatvarieties.PCRandsouthernan
5、alysisof6greenplantsshowedthat4greenplantscontainedthetargetgene.Thetransformationfrequencywas1.2%atmost.Fig3.Tab2.Ref17KeywordsWheat(TriticumaestivumL);microprojectilebombardment;ricechitinasegene;transformationcLCQ78:S512.1小麦是我国主要粮食作物之一,由真菌引起的小麦锈病,赤
6、霉病,纹枯病,白粉病等是危害我国及世界主要麦产国小麦的主要病害,在发病年份可造成小麦减产20%～30%,同时对小麦品质也有不同程度的影响.利用基因工程将外源基因导入小麦,是防止小麦真菌性病害的有效措施.几丁质酶是一种水解酶,广泛存在于植物和微生物中,为单基因所编码,具有降解几丁质(聚N一乙酰氨基葡萄糖)的作用.由于许多危害植物的病原真菌的细胞壁主要成分之一是几丁质,而植物中还未发现几丁质酶的底物.所以,几丁质酶在防御病原真菌侵害中具有重要作用.病原真菌细胞壁中几丁质的降解,不仅破坏细胞新物质的沉积
7、,致使病原体死亡,而且产生的细胞壁碎片具有诱导作用,从而刺激寄主植物的抗病反应.目前已从100种植物中检测出几丁质酶活性,许多植物几丁质酶基因已被克隆,这使转几丁质酶基因来增强作物抗病性越来越成为现实.自1992年Vasil等首次成功地将Gus和Bar基因通过基因枪法导入长期培养的胚性愈伤组织,并获得转基因植株以来,小麦的遗传工作已取得较大的突破.截止目前,人们已将许多有用的目的基因导入小麦基因组并得以整合和稳定遗传,收稿日期:2003~36-30修回日期:20044)2—17陕西省科技厅基金项目
8、(2000SM15)SupportedbytheFundofShaanxiScienceandTechnologyDepartmentofChina{通讯作者Correspondingauthor如:雄性不育基因,兔防御素基因J,高分子量麦谷蛋白基因,病毒外壳蛋白(cP)基因,雪花莲杀虫凝集素(GNA)基因,大麦胰蛋白酶抑制剂(BTI—CMe)基因",抗白粉病芪合酶(Vst1)基因,大麦种子核糖滞活蛋白(RIP)基因,甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因等.最近已有导入菜豆几丁质酶基因的
