基因枪介导bmp

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1、基因枪介导BMP前言尽管骨具有一定的自我修复能力，骨延迟愈合、骨不愈合等原因造成的长管状骨的节段性缺损是骨科较为常见且较棘手的问题之一，常常导致骨不连的发生[1]。目前的标准治疗是结合钢板的稳定固定及骨移植。但这种方法将面临的问题是：骨缺损愈合后内固定是否取出？若取出则需二次手术的创伤及住院费用，若不取出则可能导致钢板板断裂在体内或排斥反应等其他并发症得发生；另一方面，在骨移植中自体骨移植颇受青睐，但自体骨数量受限，且取自体骨会延长手术时间、增加出血、感染等相关并发症。因此，很多学者尝试探索新的治疗方法，包括骨形态发生蛋白（BMP）在内的能促进骨修复的众多细胞生长因子渐渐为人

2、所知。BMP能够诱导动物或人体间充质细胞分化为骨、软骨、韧带、肌腱和神经组织。骨形态发生蛋白分诸多亚型，但很多研究结果提示：BMP-2与骨折愈合过程尤为密切相关。有学者建议用BMP-2治疗骨不愈合。但由于骨形态发生蛋白在体内被机体的酶类降解将很快失去生物活性，促使许多研究者将目光投向了骨形态发生蛋白的基因治疗研究。基因转染是通过体外细胞培养，转染骨形态发生蛋白目的基因后再注入体内。转染后的细胞可以持续生产、释放骨形态发生蛋白，发挥作用。基因枪是一种将携带转染后的目的基因的金属微粒高速射入细胞、细胞器的转基因装置。目前国内外文献尚缺乏基因枪介导BMP-2基因转染治疗骨缺损的相关

3、报道。本实验旨在探索使用基因枪进行骨缺损治疗的可行性、转移基因在局部组织的存在时间及产生BMP-2蛋白的能力与蛋白活性，以期探索骨缺损治疗的新方法和新思路。材料和方法1材料与设备(1)-80°C冰箱中科美菱(2)DR机德国西门子(3)线锯美国赛盟兹锯业(4)电泳仪北京百晶生物技术有限公司(5)酶标仪美国宝特Bio-Tek(6)电子天平赛多利斯(7)1524高速微量离心机北京百晶生物技术有限公司(8)台式低温高速离心机贝克曼库尔特(9)各种型号离心管、滤器百川医疗器械有限公司(10)自动双蒸水蒸馏器成都雅荣生化设备实验仪器公司(11)电泳槽美国ABI公司1.2主要试剂及

4、耗材(1)苯甲基磺酰氟上海研卉生物科技有限公司(2)细胞裂解液上海研卉生物科技有限公司(3)定影粉冠龙照相器材厂(4)显影粉冠龙照相器材厂(5)ECL发光检测试剂盒上海博华生物科技有限公司(6)BCA蛋白质浓度测定试剂盒上海研卉生物科技有限公司(7)SDS-PAGE凝胶配制试剂盒上海研卉生物科技有限公司(8)二抗稀释液上海研卉生物科技有限公司(9)洗涤液上海研卉生物科技有限公司(10)封闭液上海研卉生物科技有限公司(11)一抗稀释液上海研卉生物科技有限公司(12)SDS-PAGE电泳液上海研卉生物科技有限公司(13)转膜液上海研卉生物科技有限公司(14)抗体洗脱液上海研卉生物

5、科技有限公司(15)甘油醛-3-磷酸脱氢酶康成生物公司(16)二抗JACKSON公司(17)预染蛋白质电泳分子量标准上海佳和生物科技有限公司(18)PVDF膜美国biomiga公司(19)3M滤纸(2020cm)美国biomiga公司2实验动物健康新西兰大白兔72只，雌雄不限，体重2~2.5kg，平均体重2.32kg。由新疆医科大学动物饲养中心提供[许可证号：SYXK<新>2010﹣0002]。饲养室条件：定时杀菌、消毒，温度23℃左右，相对湿度：65%左右。对动物的处理过程符合中华人民共和国科技部颁发的《关于善待实验动物的指导性意见》[2]。动物实验通过动物伦理

6、学审查(中国新疆医科大学动物实验伦理审批号：20100723008)。将72只兔编号后使用随机数余数分组法随机分为：（1）1.5cm组24只；（2）2.0cm组24只；（3）2.5cm组24只。各组又按干预随机分：治疗组（BMP-2基因治疗组）12只和对照组12只。材料和方法........041.材料与设备.......042.实验动物......053.实验方法......054.标本采集与检测....075.统计学处理.......10结果.....11讨论.....14小结.....19讨论1骨折的自然愈合进程本实验中1.5cm对照组基本反映了新西兰兔骨折愈合的自然进

7、程：从1周后大体标本的血肿机化填充，X线片的少量密度明显低于正常骨质的早期骨痂影；到4周后大体标本的纤维性骨痂形成，X线片的较丰富骨痂形成，缺损两断端形成间断骨桥连接；再到9周后大体标本的缺乏光泽，质较硬，表面凹凸不平呈灰白色的骨痂形成，X线片的较丰富骨痂形成，缺损两断端形成相对连续骨桥连接。动态实验观察结果显示：骨折的自然进程是一个较为缓慢而循序渐进的动态演变过程。骨是通过两个不同的方式形成：软骨内骨化，软骨组织逐渐被骨取代；膜内骨化它不以软骨为媒介，而是由间充质细胞直接凝合而成[3]。在生命进程中，