3.1菊花的组织培养 (1)

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1、课题1菊花的组织培养指植物的离体部分（包括任何器官、组织、细胞或原生质体），在人工控制的培养基及环境条件（温度及光照）下，得以生长和分化成完整植株的一种无菌培养技术。1、组织培养（一）植物组织培养的基本过程2、植物组织培养的原理植物细胞的全能性概念：细胞的全能性是指已分化的细胞具有发育成完整个体的潜能。原因：是生物体的每一个细胞都含有该物种所特有的全套遗传物质植物细胞的全能性植物细胞的全能性细胞全能性体现在发育完整个体，而不是只发育成部分器官。即“具有”和“体现”全能性是有区别的。（1）理论上活细胞都具有全能性（2）只有发育为完整个体，才能体现或表现细胞的全能性细胞生物个

2、体具有全能性体现全能性（3）表现条件：①离体状态；②一定的营养物质；③植物激素；④其他事宜的外界条件（温度、pH、氧气、光照、无菌等）（4）细胞全能性的种类：体细胞全能性和生殖细胞全能性。（5）不同细胞全能性表达的难易程度受精卵＞生殖细胞＞分生组织等薄壁细胞＞已分化的细胞3、细胞分化（1）概念：在植物个体发育的过程中，细胞在形态、结构和生理功能上都会出现稳定性的差异，形成这些差异的过程叫做细胞的分化。（2）细胞分化的实质：基因选择性表达。（3）适用对象：多细胞生物。（4）特点：持久性；稳定性和不可逆性；普遍性。植物组织培养过程示意图2、上面的示意图中还有什么地方不够完善的

3、？没有进行灭菌处理，试管也没有做密封等。离体的植物器官、组织、细胞脱分化愈伤组织再分化根芽植物体植物组织培养的基本过程愈伤组织是通过细胞分裂形成的，其细胞排列疏松而无规则，高度液泡化呈无定形状态的薄壁细胞。（未分化的细胞）（1）外植体：用于离体培养的植物器官或组织片段等。（2）脱（去）分化：由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程。（3）再分化：经脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，可以重新分化成根或芽等器官的过程。（二）影响植物组织培养的因素材料的选择、营养成分、激素、一定的外界因素（温度、空气、无菌环境、适合的PH、适时光照等）。1、外植体的选取（1）容易进行无性繁

4、殖的植物容易进行组培。（2）幼龄、保存时间短的植物容易培养成功。（3）菊花的组培，一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。2、培养基的配制（1）主要成分：①大量元素：N、P、K、Ca、Mg、S等。②微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co等。③有机物：蔗糖、甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素等。（2）培养基中各成分的作用成分作用大量元素和微量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐蔗糖提供碳源，维持细胞渗透压甘氨酸、维生素、烟酸、肌醇等满足离体植物细胞在正常代谢途径受一定影响后所产生的特殊营养需求。思考：为什么在培养基中不直接加入葡萄糖？MS固体培养基成分及比例同微生物培养

5、基相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。阅读课文，思考以下问题1.同微生物培养基相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？2、你认为组织培养过程中，成功的关键有哪些？这些步骤的适宜条件是什么？组织的脱分化及愈伤组织的再分化。植物组织培养过程中，影响植物细胞脱分化、再分化的最重要因素是植物激素。3、植物激素对组织培养的影响在培养基中需要添加生长素和细胞分裂素等植物激素，其浓度、使用的先后顺序、用量的比例等都影响结果。高利于根分化、抑制芽的形

6、成生长素/细胞分裂素低利于芽的形成适中利于愈伤组织的形成生长素/细胞分裂素高生长素/细胞分裂素低4、pH、温度、光照等条件的影响不同植物对各种条件的要求往往不同。进行菊花组培时，一般将pH控制在5.8左右，温度控制在18——22℃，并且每日用日光灯照射12h。（三）菊花组织培养的实验操作1、实验操作流程（1）制备MS固体培养基①配制各种母液②配制培养基：琼脂和水加热融化→加入蔗糖→加入各种母液→加蒸馏水定容→调节pH→分装。注意：菊花茎段组培容易，因此不必添加植物激素。③灭菌：将分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌。（2）外植体消毒取菊花嫩枝→加洗衣粉刷洗→流水

7、冲洗20min，并用无菌吸水纸吸取水分→放入70%酒精中摇动2—3次，持续6—7s→无菌水清洗，并用无菌吸水纸吸取水分→放入质量分数为0.1%的氯化汞中1—2min→无菌水清洗（至少3次）（3）接种①接种室消毒：70%酒精喷雾消毒空气，用酒精擦拭操作台并用紫外线照射20min。②无菌操作：操作必须在酒精灯火焰附近进行。③材料的切取和接种：小段0.5—1cm，形态学上端再上，每瓶接种6—8块外植体。（4）培养温度18—22℃，光照12h，外植体上长出愈伤组织后，待其长到1—1.5cm时，可进行试管苗培养。（5）移栽用流水清洗根部