优：3.1《菊花的组织培养》

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1、专题3植物组织培养技术一、基础知识（一）复习1、细胞的分化（1）概念：在个体发育中，相同细胞的后代在形态、结构、生理功能上发生稳定性差异的过程（2）特点：②稳定性：③全能性：①持久性：是一种持久性的变化，它发生在生物体的整个生命过程中,在胚胎期达到最大限度细胞分化是稳定的，一般是不可逆转的已分化的细胞，仍具有发育的潜能课题1菊花的组织培养（4）原因：基因在特定的时间和空间条件下的选择性表达的结果（3）结果：形成不同的细胞和组织2、细胞的全能性（1）定义：生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能的特性（2）原理：生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育

2、成为完整个体所必需的全部基因高度特化的动物细胞，从整个细胞来说，全能性受到限制。但它的细胞核仍然保持着全能性，这是因为细胞核内含有该物种遗传性所需要的遗传物质已分化的植物细胞，仍具有全能性（3）实例受精卵>生殖细胞>体细胞（4）全能性的比较:随着细胞分裂次数的增多，细胞的分化程度越来越高，细胞的全能性越来越小。（二）植物组织培养基本过程:离体组织或细胞植物体脱分化细胞分裂素≈生长素愈伤组织芽根细胞分裂素>生长素细胞分裂素<生长素再分化植物细胞培养不需要光需要光人参的愈伤组织菠萝的愈伤组织植物组织培养1、必要条件：2、原理:细胞的全能性外植体：用于离体培养的植物细胞、组织或器官

3、3、相关概念:细胞离体一定的营养物质、激素和其他外界条件脱分化：再分化：愈伤组织:细胞排列疏松而无规则,是高度液泡化的、成无定形状态的薄壁细胞由高度分化植物组织或细胞产生愈伤组织的过程愈伤组织重新分化成根、芽等器官（三）影响植物组织培养的因素1、植物组织烟草和胡萝卜的组织培养较为容易枸杞愈伤组织的芽诱导比较难同一植物材料的年龄、保存时间的长短会影响实验结果菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝2、不同的离体组织和细胞对营养、环境等条件的要求相对特殊，需配制适宜的培养基MS培养基主要成分包括：A、大量元素:N、P、S、K、Ca、Mg等B、微量元素:B、Mn、Cu、

4、Zn、Fe、Mo、I、Co等C、有机物、植物激素讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素生长素类：2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、吲哚乙酸（IA

5、A）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）细胞分裂素类：激动素（KT）、6－苄基嘌呤（6－BA）、玉米素（ZT）赤霉素类：赤霉酸（GA3）3、植物激素的影响②生长素和细胞分裂素作用植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势使用顺序实验结果先使用生长素，后使用细胞分裂素有利于细胞分裂，但不利分化先使用细胞分裂素后使用生长素细胞既分裂、也分化同时使用分化频率高生长素细胞分裂素：>有利于根的分化生长素细胞分裂素：<有利于芽的分化，抑制根的分化生长素细胞分裂素：＝促进愈伤组织生长③生长素和细胞分裂素同时使用

6、，用量的比例对植物细胞发育方向的影响4、pH、温度、光照pH控制在5.8左右，温度控制在18－22。C,每日用日光灯照射12h（1）培育无病毒植株（2）培养紫草愈伤组织,提取紫草素（治疗烫伤和割伤的药物以及染料和化妆品的原料）（4）基因工程中亦需用到植物组织培养的方法（四）植物组织培养的应用：（3）诱导离体的植物组织形成具有生根发芽能力的胚状结构，包裹上人造种皮，制成人工种子，可以解决有些作物品种繁殖能力差，结子困难或发芽率低等问题人工种子二、实验操作（一）制备MS固体培养基MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4。C保存配制好的培养基母液来制备1、配制各种母液①无机

7、物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量2、配制培养基分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml①配制培养液②调PH③培养基的分装由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素3、灭菌分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝（二）外植体消毒2、消毒①流水冲洗菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻