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《布鲁氏菌Omp25的表达及抗原性分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、中国兽医学报2009年6月第29卷第6期ChinJVetSciJun.2009Vol.29No.6733布鲁氏菌Omp25的表达及抗原性分析1,31,2111111113邱业峰,徐杰,王玉飞,赵瑾,乔凤,钟志军,汪舟佳,杜昕颖,曲勍,陈泽良(1.军事医学科学院疾病预防控制所,北京100071;2.兰州大学生命科学学院,甘肃兰州730000;3.军事医学科学院实验动物中心,北京100071)摘要:克隆羊外膜蛋白Omp25基因,在大肠杆菌中表达、纯化,并对Omp25蛋白的抗原性进行分析。以布鲁氏菌染色
2、体DNA模板,扩增Omp25基因,双酶切后克隆至pET32a上,在大肠杆菌ER2566(DE3)中诱导表达,组氨酸结合树脂柱纯化,Westernblotting鉴定Omp25蛋白的免疫原性。将Omp25克隆至载体pET32a,提取的重组质粒经PCR鉴定、双酶切鉴定和测序分析确定目的基因成功插入到了克隆载体中。将重组质粒转化于大肠杆菌ER2566(DE3)中表达获得HIS融合蛋白,SDS2PAGE分析证明,表达产物为43000的融合蛋白。Westernblotting分析表明,所表达的蛋白具有免疫原
3、性。结果表明,成功地表达并纯化了Omp25蛋白,而且纯化的蛋白具有一定的免疫原性。本试验为进一步研究Omp25蛋白的功能以及寻找布鲁氏菌的诊断性蛋白奠定了基础。关键词:布鲁氏菌;Omp25蛋白;原核表达;免疫原性中图分类号:S852.614文献标识码:A文章编号:100524545(2009)0620733204ExpressionandantigenicityanalysisoftheOmp25proteinofBrucellamelitensis1,31,21111QIUYe2feng,XUJ
4、ie,WANGYu2fei,ZHAOJin,QIAOFeng,ZHONGZhi2jun,WANGZhou211113jia,DUXin2ying,QUQing,CHENZe2liang(1.InstituteofDiseaseControlandPrevention,AcademyofMilitaryMedicalScience,Beijing100071,China;2.CollegeofLifeScience,LanzhouUniversity,Lanzhou730000,China;3.La
5、boratoryAnimalCenter,AcademyofMilitaryMedicalScience,Beijing100071,China)Abstract:CloneandexpresstheOmp25proteinofB.melitensisinE.coli,purifytheexpressedproteinanddetectitsimmunogenicity.Agenerecodingoutermembraneprotein25000(Omp25)wasamplifiedfromthe
6、genomicDNAofB.melitensisbyPCR.TheamplifiedfragmentsweredigestedwithBamHIandSalI,andthenclonetothevectorpET32a.TheconstructedrecombinantplasmidpET32a2omp25wastransformedtoE.coliER2566(DE3)andwasinducedtoexpressthefusionprotein.Thentheproteinwaspurified
7、byhistidine2bindingresincolumnchromatogra2phyandtheimmunogenicitywasdetectedbyWesternblotting.ThePCRproductofOmp25genewasclonedtothevectorpET32aandtherecombinantvectorwasconfirmedbycolonyPCRidentification,recombinantvectordigestedidentificationandsequ
8、encinganalysis.ItwassuccessfullyexpressedinE.coliER2566(DE3)asafusionproteinwithhistidineatthepresenceofIPTG,andaspecificproteinbandof43000wasfoundwhenidentifiedbySDS2PAGE.Westernblottingshowedgoodimmunoreactivityoftheexpressedproduct.Theconcl
