结核分枝杆菌Mtb81蛋白的克隆_表达及抗原性分析.pdf

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1、中国热带医学2010年第10卷第3期CHINATROPICALMEDICINEVol.10No.3March2010263［论著］结核分枝杆菌Mtb81蛋白的克隆、表达及抗原性分析杨柳，苏明权，马越云，岳乔红，郝晓柯摘要：目的对结核分枝杆菌Mtb81抗原基因进行克隆、表达及纯化，并评价其抗原性。方法应用聚合酶链反应技术扩增结核分枝杆菌H37RvMtb81DNA序列；将目的基因构建大肠杆菌高效表达株；亲和层析柱纯化重组蛋白；经SDS-PAGE电泳鉴定；通用ELISA法进行重组蛋白的抗原性检测分析。结果获得了结核分枝杆菌抗原Mt

2、b81基因，在大肠杆菌BL21中高效表达，Western印迹结果证实该重组蛋白能与抗结核分支杆菌多克隆抗体发生特异免疫结合反应。ELISA分析中，该纯化的重组抗原敏感性、特异性和准确性分别为：35.8%、98.3%和56.7%，具有良好的抗原性和较高的特异性。结论结核分枝杆菌Mtb81重组蛋白抗原具备良好的抗原性与特异性，为结核病诊断、重组疫苗应用和免疫效应检测以及抗原、抗体的大规模制备打下基础。关键词：结核分枝杆菌；抗原；Mtb81蛋白；基因表达中图分类号：R521文献标识码：A文章编号：1009-9727（2010）3-

3、263-02Cloning，expression，purificationandantigenicityassayofMtb81proteinofMycobacteriumtuberculosis.YANGLiu，SUMing-quan，MAYue-yue，etal.（CenterofClinicalLaboratoryMedicineofPLA，XijingHospital，TheFourthMilitaryMedicalUniversity，Xi'an710032，Shanxi，P.R.China）Abstract：Ob

4、jectiveToClone，expressandpurifytheMtb81geneofMycobacteriumtuberculosisandestimateitsantigenicity.MethodsThegenesequenceofMtb81ofM.tuberculosisstrainH37RvwasclonedbyPCR.ThegenewasinducedtoexpressinEcoli.ExpressedproductswereconfirmedbySDS-PAGE.Theantigenicityofrecom

5、binantproteinwasdetectedbyindirectELISA.ResultsThegenesequenceofMtb81wasobstainnedandtheantigenwasexpressedinE.coliBL21.WesternblotanalysisshowedthattherecombinantantigencouldimmunobindtothepolyclonalantibodyofMycobacteriumtuberculosisspecifically.Thesensitivity，sp

6、ecificityandaccuracyofthepurifiedrecombinantantigenwere:35.8%，98.3%and56.7%byELISA.ConclusionTheMtb81recombinantantigenpresentedfavourableantigenicityandspecificity.ItwillbeusefulforthedetectionofimmunityeffectivenessandpreparationoftheantigenandantibodyofMtb81prot

7、eininlargequantity.Keywords：Mycobacteriurntuberculosis;antigen;Mtb81protein;geneexpression结核病是一种由于感染结核枝支杆菌而引起的以呼吸道1.1.2血清来源120例结核患者血清由西安市结核病院提为主的慢性传染病。在结核分枝杆菌的培养滤液中发现100多供，肺结核经临床表现、体征、胸部X线及细菌学检查确诊，且种蛋白质，其中分泌蛋白是结核杆菌在生长过程中分泌到细胞经酶联免疫吸附试验（ELISA）抗结核分支杆菌纯蛋白衍生物外的一类蛋白，在结核病

8、患者的免疫反应中起重要作用，结核（PPD）抗体检测确定为抗结核抗体阳性血清；30例其他胸部疾分枝杆菌分泌蛋白可介导细菌及人体免疫系统之间的作用。因病（非结核患者）血清及30例健康体检者血清由本院检验科提此用结核分枝杆菌分泌蛋白为抗原检测血清中的抗体，对结核供。病进行诊断。近年来许多研究者应