抑制CD24表达对SW620细胞粘附能力影响的研究

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1、抑制CD24表达对SW620细胞粘附能力影响的研究作者：邓启亮王新颖王伟飞彭亮青海涛姜泊【摘要】目的：检测了DLD1、HT29、HepG2、SW480、SW620中CD24的表达差异，通过抑制SW620中CD24的表达量来观察CD24对细胞黏附能力的影响。方法：利用RTPCR技术及流式细胞术检测各个细胞系中CD24的表达量，筛选出表达量最高的，将其CD24的表达量抑制，看其对基底膜几种介质粘附能力的改变。结果：①RTPCR结果显示在消化道肿瘤细胞株中，CD24的表达是有差异的，其中SW620、HT29、HepG2中CD24的基因表达量高，而SW

2、480及DLD1中CD24的基因表达量低;②低表达CD24后抑制了SW620细胞对四种不同介质的粘附能力。结论：CD24在消化道肿瘤细胞中表达是有差异的，抑制CD24的表达可以抑制其粘附能力。【关键词】CD24;细胞粘附12大肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，严重威胁人类的生命健康，在北美、西欧各国大肠癌占全部癌症死亡原因的第3位[1]。CD24是HSA在人类中的同源分子，其定位于染色体的6q21[2，3]，表现出等位基因的多态现象，具有2194个碱基。这个分子被发现出现在鼠造血细胞、胸腺细胞[4]、发育中的神经细胞[5]中，而且最近的研究表明它在人类各

3、种肿瘤中都高表达。CD24是一个粘蛋白样黏附分子[6]，研究表明，CD24在卵巢肿瘤[7，8]、乳腺癌[9]、前列腺癌[10，11]、胰腺癌[12]、肝细胞癌[13]、结肠癌[14，15]、膀胱上皮细胞癌[16]、胆管癌[17]中是具有高表达的。最近Sagiv[14]等发现在90.7%的结直肠腺瘤和86.3%的结直肠腺癌表达CD24。在膀胱癌中[18]，CD24是Ral信号通路的下游目标基因，RalA/B的敲低能降低CD24的含量从而影响细胞肌动蛋白骨架，使细胞失去黏附能力，MTLYCD24mut细胞(CD24缺失细胞)与纤维连接蛋白、层黏连蛋白、

4、胶原Ⅰ和胶原Ⅳ的结合能力下降，以纤维连接蛋白最为明显，诱导MTLYCD24mut细胞株表达CD24后，肿瘤细胞与纤维连接蛋白的结合能力显著增强。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1细胞株：HT29、HepG2、SW480、SW620和DLD1细胞株均来自ATCC(美国组织培养保藏中心)。　　1.1.2CD24SiRNA：由吉玛公司合成片段序列如下：　　1CD241555CAAGUAUUUGGGAAGUGAATT12　　UUCACUUCCCAAAUACUUGAT　　2CD241578GGAAGCUAAUUUGCAUAAATT　　UUUAU

5、GCAAAUUAGCUUCCAG　　3CD24112CCAGAGUACUUCCAACUCUTT　　AGAGUUGGAAGUACUCUGGGA　　4CD2467GAUUUAUUCCAGUGAAACATT　　UGUUUCACUGGAAUAAAUCTG　　无意义UUCUCCGAACGUGUCACGUTT　　ACGUGACACGUUCGGAGAATT　　CD24引物参考文献设计，GAPDH片段引物参照文献设计，由上海英俊公司合成，序列：　　CD2412　　sense5'GTGAAGGTCGGAGTCAACG3'　　antise5'GAGTGAGACC

6、ACGAAGAGACTGGC3'预计扩增　　长度222bpGAPDH　　sense5'CCATGGAGAAGGCTGGGG3'　　antise5'CAAAGTTGTCATGGATGACC3'预计扩增　　长度197bp　　2实验方法　　2.1细胞培养和siRNA转染　　细胞株均在37℃50mL/LCO2条件下，培养于含100mL/L胎牛血清、RPMI1640中，每周传代2次。siRNA干扰技术使用的是Invintrogen公司Lipofectamine2000tm试剂。具体步骤参照试剂盒。　　2.2细胞株的筛选12　　2.2.1半定量RT

7、PCR检测各株细胞CD24mRNA表达水平总RNA的提取按照英俊公司TRIZOLReagent步骤，各取5g总RNA，按RevertAidTMHMinusFirstStrandcDNASynthesisKit操作说明合成cDNA扩增CD24和GAPDH采用相同的cDNA上样量(1L)和反应参数，反应参数设置：94℃预变性5min，然后进入以下36个循环：94℃变性45sec，55℃退火1min，72℃延伸1min。循环完毕，72℃延伸5min。　　2.2.2流式细胞检测SW480、HepG2、DLD1、HT29、SW620中CD24蛋白表达水平将

8、细胞消化，并重悬细胞，10uL兔血清(5%封闭)，洗涤后再加入2ulCD24的mAb(1：100)，在4℃放置60分钟;洗