小鼠Oct4基因的克隆及其真核表达载体的构建

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1、中文摘要目的：Oct4是第一个被发现只在多能细胞中表达的转录因子，其功能被认为是控制细胞多能性的决定性因素。Oct4的这种作用机制目前并未明确，本研究将克隆小Roct4基因，构建其真核表达载体pEGFP-N2．Oct4，为今后能进一步研究小鼠Oct4基因的生物学功能奠定实验基础。方法：用TRIzolReagent提取小鼠胚胎干细胞总RNA，并经反转录一聚合酶链反应获得小鼠Oct4DNA，将该基因连接克隆到含有增强型绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pEGFP-N2上，以构建重组质粒pEGFP．N2一OCT4。结果：获取小鼠胚胎干

2、细胞OCT4基因的全序列eDNA。将能发出绿色荧光的增强型绿色荧光蛋白报告基因融合OCT4基因构建OCT4eDNA真核表达质粒，酶切后经DNA电泳鉴定及DNA澳]序证实准确无误。结论：成功构建了重组质粒pEGFP-N2一OCT4，将增强型绿色荧光蛋白报告基因融合在OCT4基因的3’端，既保留了OCT4的生物学活性，又便于在研究OCT4生物学功能实验中可检测到蛋白表达。关键词：小鼠；Oct4；真核表达载体；质粒pEGFP-N2lIAbstractobjectives：ABSTRACTToclonemouseOct4andconst

3、ructitseukaryoteexpressionvector，∞astoprovidebasisfortheresearchofitsbiologicalfunction．Methods：TheexperimentswereconductedinJiangxiKeylaboratoryofMolecularMedicalSciencefromJanurary2007toSeptember2007．ThetotalRNAWasisolatedbyTRIzolReagentfrommouseembryonicstemcellsa

4、nditseDNAWasgainedbyRT—PCR．TheOCT4genewasclonedintoeukaryoticexpressionvectorpEGFP-N2ofEGFPreportedgeneencodinggreenfluorescenceproteinintheformoffusionprotein，∞astorebuildpEGFP—N2一Oct4．Results：ThetotalcDNAencodingofOCT4geneWasobtained．OCT4geneWasclonedintoeukaryotic

5、expressionvectorpEGFP-N2ofEGFPreportedgeneencodinggreenfluorescenceproteinintheformoffusionprotein．OCT4geneintherecombinantplasmidpEGFP-·N2·-OCT4wasexactlyconf'muedbyDNAsequencingandDNAelectrophoresisafterenzymerestriction．Conclusion：Theexpressionvectorofrecombinantp

6、lasmidpEGFP-N2一OCT4issuccessfullyconstructed．The3'endofOCT4geneisfused丽meukaryoticexpressionvectorpEGFPoN2ofEGFPreportedgeneencodinggreenfluorescenceproteinandthebiologicalactivityofOCT4iskept，whichCancontributetothedetectionofproteinexpressionintheresearchofitsbiolo

7、gicalfunction．KeyWords：mouse：Oct4：EukaryonExperssionVector；pEGFP-N2111学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名(手写)：磁石晦签字日期：沙口脾多月I7日学位论文版

8、权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编