Arenobufagin抑制前列腺癌细胞转移的作用及分子机制研究

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1、暨南大学硕士毕业论文题目(中英对照)：Arenobufagin抑制前列腺癌细胞转移的作用及分子机制研究Studyontheeffectandmolecularmechanismofmetastasesinhibitionbyarenobufagininprostatecancercells作者姓名：陈丽萍指导教师姓名叶文才张冬梅及学位、职称：博士教授博士研究员学科、专业名称：药学药物化学学位类型：科学学位论文提交日期：2018年6月论文答辩日期：2018年5月23日答辩委员会主席：陈哲生教授论文评阅人：庞建新教授朱孝峰

2、研究员学位授予单位和日期：暨南大学2018年6月30日暨南大学硕士毕业论文中文摘要研究背景和目的：上皮-间质转化（Epithelial-MesenchymalTransition，EMT）在前列腺癌转移中扮演着重要角色，因此，开发EMT抑制剂可能是治疗转移性前列腺癌的可行策略。Arenobufagin是本课题组从蟾酥中分离得到的抗肿瘤药物先导物，能抑制多种实体肿瘤的增殖。本课题的目的是评价arenobufagin能否抑制前列腺癌PC3细胞的EMT和转移，并揭示其作用机制。研究方法：（1）MTT法检测arenobufag

3、in对PC3细胞的非毒剂量；（2）罗丹明-鬼笔环肽染色实验观察细胞骨架的变化；（3）蛋白免疫印迹法检测PC3细胞EMT标志物的表达水平；（4）Woundhealing实验和Transwell实验评价arenobufagin对PC3细胞迁移、侵袭能力的影响；（5）免疫荧光实验观察arenobufagin对β-catenin核转位的影响；（6）qPCR检测β-catenin/TCF/LEF-1复合物相关靶基因的mRNA水平；（7）双荧光素酶报告基因实验检测β-catenin/TCF/LEF-1复合物的转录活性；（8）在PC

4、3细胞上瞬时转染β-catenin过表达质粒和β-cateninsiRNA，考察β-catenin在arenobufagin介导的EMT抑制作用中扮演的角色；（9）构建裸鼠皮下异移植瘤模型和肺转移瘤模型，体内评价arenobufagin抑制PC3细胞EMT和转移的活性；免疫组化法检测异移植瘤EMT相关蛋白的表达水平；HE染色观察肺组织转移灶的形成以及各脏器组织的病理情况。研究结果：MTT实验测得arenobufagin对PC3细胞的非毒剂量为8nM，即细胞增殖抑制率为10%对应的药物浓度；罗丹明-鬼笔环肽染色实验结果显

5、示，arenobufagin处理前后，PC3细胞的形态由间质表型（纺锤体型）转换成上皮表型（圆形）；蛋白免疫印迹结果显示，arenobufagin下调间质表型标志物（ZEB1、N-cadherin、Vimentin、Snail、Slug和Twist1），上调上皮表型标志物（E-cadherin、ZO-1和Claudin-1）的表达；Woundhealing实验和Transwell实验结果显示，arenobufagin抑制PC3细胞的迁移和侵袭能力；以上结果表明arenobufagin抑制PC3细胞的EMT。另外，are

6、nobufagin下调了PC3细胞β-catenin的mRNA和蛋白水平；免疫荧光实验结果显示，arenobufagin抑制β-catenin的核转位；双荧光素酶报告基因实验结果显示，arenobufagin抑制β-catenin/TCF/LEF-1复合物的转录活性；qPCR结果显示，arenobufagin下调β-catenin/TCF/LEF-1复合物调控的与肿瘤侵袭转移相关的靶基因mRNA水平。β-catenin的过表达和敲低分别拮抗和协同arenobufagin抑制PC3细胞EMT的活性，说明β-catenin

7、参与了arenobufagin抑制PC3细胞EMT的作I暨南大学硕士毕业论文用。体内活性评价数据显示，arenobufagin抑制PC3细胞裸鼠移植瘤的EMT间质标志物，上调上皮标志物的表达，减少肺转移灶的形成，同时arenobufagin对裸鼠各脏器组织无明显损害作用。研究结论：本研究首次揭示arenobufagin通过下调β-catenin抑制PC3细胞EMT，从而抑制前列腺癌细胞的转移，为arenobufagin发展成为治疗转移性前列腺癌的候选药物提供理论依据。关键词：转移性前列腺癌，上皮-间质转化，arenob

8、ufagin，β-cateninII暨南大学硕士毕业论文AbstractBackgroundandObjective:Epithelial-mesenchymaltransition(EMT)playsanimportantroleinprostatecancer(PCa)metastasis.Thus,developmentof