隐孢子虫截短热休克蛋白70-HSP70-基因的原核表达及其抗原性分析

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1、畜牧与兽医2014年第46卷第12期·5·隐孢子虫截短热休克蛋白70(HSP70)基因的原核表达及其抗原性分析1，2，331，21，21，21，2彭昊，唐林生，李军，陶立，陈泽祥，潘艳，1，21，21，2*3*谢永平，许力干，杨威，黄维义(1．广西兽医研究所，广西南宁530001;2．广西畜禽疫苗新技术重点实验室，广西南宁530001;3．广西大学动物科技学院，广西南宁530005)摘要:根据GenBank上的安氏隐孢子虫HSP70基因主要抗原片段区序列设计特异性引物，用ＲT－PCＲ方法扩增出目的片段，构建克隆载体，双酶切后连接到pET－32a表达载体，成功构建了表达质粒pET－32a

2、－HSP70。将鉴定正确的重组质粒转化到表达菌中，IPTG诱导表达，表达产物经过SDS－PAGE和Westernblot鉴定和分析，证实获得HSP70融合蛋白。以鼠抗安氏隐孢子虫卵囊高免血清为一抗进行Westernblot检测，试验结果证实重组HSP70蛋白具有良好的免疫反应性，为建立隐孢子虫病免疫学诊断方法奠定了基础。关键词:隐孢子虫;热休克蛋白70;表达;免疫原性中图分类号:S852.72+3文献标志码:A文章编号:0529－5130(2014)12－0005－05ProkaryoticexpressionoftruncatedHSP70ofCryptosporidiumandant

3、igenicityanalysisoftherecombinantprotein1，2，331，21，21，21，2PENGHao，TANGLinsheng，LIJun，TAOLi，CHENZexiang，PANYan，1，21，21，2*3*XIEYongping，XULigan，YANGWei，HUANGWeiyi(1．GuangxiVeterinaryＲesearchInstitute，Nanning530001，China;2．GuangxiKeyLaboratoryofAnimalVaccinesandNewTechnology，Nanning53001，China;3．Co

4、llegeofAnimalScienceandTechnology，GuangxiUniversity，Nanning530005，China)Abstract:SpecificprimersweredesignedbasedonthetruncatedgeneencodingtheantigenicdomainofCryptosporidiumandersoniHSP70fromGenBank．ThetargetfragmentwasamplifiedbyＲT－PCＲandthecloningvectorwasconstructed．Doubleenzymedigestionwaspe

5、r-formed，andthentheproductwassubclonedintotheprokaryoticexpressionvectorpET－32a．TherecombinantplasmidpET－32a－HSP70weresuccessfullyconstructedandtransformedintoEscherichiacoliBL21(DE3)．WiththeinductionofIPTG，therecombinantproteinwasexpressed．TheanalysesofSDS－PAGEandWesternblotshowedthatHSP70fusion

6、proteinwassuccessfullyexpressed，andtherecombinantproteinshowedgoodreactinogenicityusingthepositiveserumagainstC.andersoni．Thestudyprovidesapotentialcandidateantigenfordevel-opmentofimmunodiagnosticmethodofcryptosporidiosis．Keywords:Cryptosporidium;HSP70;expression;antigenicity隐孢子虫病是重要人畜共患病之一，受到越来

7、越陷的人，特别是AIDS病人，常会引起长期严重的腹多的国家和地区的重视。隐孢子虫感染免疫系统正常泻并导致死亡。镜检可见有大量卵囊排出，最终结果［1］的人和动物，多表现为自限性疾病，但是免疫系统缺造成感染宿主体重下降和生长发育迟缓。目前主要应用于检测隐孢子虫的方法是传统病原收稿日期:2014－03－17学方法，直接检测卵囊。传统的检测方法是借助显微基金项目:公益性行业(农业)专项(201103008);广西基本科镜进行粪便或体液中的病