(最新)鸽ⅰ型副粘病毒jsg4分离株生物学特性与免疫原性研究

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1、扬州大学硕士学位论文鸽Ⅰ型副粘病毒JSG-4分离株生物学特性与免疫原性研究姓名：贾华敏申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：戴鼎震;秦爱建20060501贾华敏鸽I型副粘病毒JSG_4分离株生物学特性与免疫原性研究l鸽1型副粘病毒JSG-4分离株生物学特性与免疫原性研究学科专业：预防兽医学研究生：贾华敏导N-戴鼎震教授秦爱建教授摘要鸽1型副粘病毒病(PigeonParamyxovirus一1，PPMV-I)，又称鸽瘟，是由新城疫病毒引发的鸽的一种急性传染病。该病流行期长，发病率和死亡率高，以下痢和神

2、经症状为主要特征，是当前养鸽业发展的主要难题。不仅给养禽业带来了重大损失，而且给我国的禽产品出口设置了商业壁垒。国际兽疫局(OIE)将其列M类病。近二十年来，由于疫苗的广泛使用，新城疫已由过去大面积的爆发变成了现在的零星散发，相应的症状也由过去的典型变成非典型。由于PPMV-1对鸽有很强的致病性，且PPRV-I变异极快，用NDV疫苗不能产生完全有效的保护，在一些免疫或非免疫场新城疫仍时有发生。根据PPMV-1对鸽和鸡致病性的不同，我们将其大致分为3种类型：第1种为对鸽致病而对鸡不致病的鸽中强毒株或较弱毒株

3、，此类是引起亚、欧鸽群广泛流行的病原体；第2种为对鸽和鸡都致病的强毒株；第3种为对幼鸽和雏鸡均不致病的弱毒株和无毒株。目前我国存在的鸽源基因型包括Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ三型。本研究通过对JSG-4分离株的系列生物学特性测定，序列分析以及免疫原性实验，以期为鸽1型副粘病毒分子流行病学调查和预防PPMv—l的发生作出贡献。我们从南京某养鸽场疑似患鸽瘟的病鸽脑内分离到一株病毒，命名为JSG-4株。通过对其进行负染透射电镜形态学观察，SPF鸡胚接种试验，分离株HA及NDV血清Ⅲ试验，动物回归试验，MDT、ICPI和ⅣPI、E

4、ID50扬州大学硕士学位论文2一毒力学指标测定。结果表明：该分离株电镜下圆形，有纤突，直径200nm．300nm，似副粘病毒的形态结构；盲传三代后分离株HA为81092，能被NDVLasota株阳性血清中和；MDT为63h、ICPI为1．09、IVPI为0．43、ELD50为10。7—6／0．1ml；动物回归试验鸽出现典型的新城疫症状，而鸡不发病，仅能通过m检测到新城疫抗体。证明该分离株为鸽1型副粘病毒毒株。为了进一步了解JSG一4病毒分离株的相关分子生物学情况，参考已发表的禽I型副粘病毒F、HN蛋白核酸

5、序列，合成了三对引物，经RT—PCR扩增、定向克隆至tJpM918一T质粒载体，测定其核酸序列，并分析比较3SG一4株F基因核酸序列与其它参考毒株之间的同源性，以F蛋白核苷酸序列绘制系统发育树。结果表明：JSG一4株的F基因ORF全长1662bp，编码553个氨基酸；HN基因ORF全长1734bp，编码577个氨基酸；JSG-4株与LaSota同源性最高，达到98．8％；本实验中的JSG-4分离株F0蛋白裂解位点的氨基酸组成为：112G-R-Q-G-R-Ln7；并确定JSG-4株属于基因工I型。为研究其免

6、役原性，我们将JSG-4株制作成灭活油乳剂苗。实验结果表明：经此种疫苗免疫后接种鸽无不良反应；免疫效果良好，免疫3周后抗体水平达到6．61092；免疫21d后攻毒，保护率可达100％(10／10)；免疫对比试验表明，鸽l型副粘病毒油乳剂苗对鸽1型副粘病毒的攻毒保护率高于鸡新城疫Lasota油乳剂保护率(80％)。关键词：鸽I型副粘病毒JSG一4分离株生物学特性F、HN基因克隆序列分析免疫原性贾华敏鸽I型副粘病毒JSG一4分离株生物学特性与免疫厦性研究三Researchesontheantigenicity

7、andbiologicall·⋯n●●fCIIaracteristicsoIDll：eonoaramyxovirus-IJSG．．4strainM．S．Candidate：HuaminJiaSupervisor：Prof．DingzhenDaiProf．aijianQinAbstractPigeonParamyxovirus1O'PMV-1)，SO-calledpigeonplague，causedbyNDvirus(NDV)，isaseriousillnessofpoultry．Ithasahi曲mor

8、bidityandmortality．Theclinicalsignswerecharacterizedbybilateralconjunctivitisandneurological．It’Sthebiggesttroublemakerofthedevelopmentofthepoultryindustry，andinvokestradebarriersandcausessignificanteconomiclossesin