禽副粘病毒2型血清学调查、m基因序列测定及中国分离株的研究

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1、～l。k_-一、．中文摘要禽副粘病毒2型(APMV-2)是副粘病毒科、禽腮腺炎病毒属的成员，是养禽生产中的常见病原之一。本研究主要进行了APMV-2的血清流行病学调查，采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆了APMV-2的M基因，制备了APMV-2的血凝素特异性单克隆抗体，并开展了对四株APMV-2中国国内分离株的研究。2003至U2005年从包括鸡、鸭、孔雀、麻雀、鸵鸟和鹧鸪在内的6个的禽种收集了9156份血清，采用血凝抑制实验(HI)对APMV-2抗体的流行情况进行了检测。结果表明，APMV．2在中国不同禽种的感染

2、普遍存在，鸡、鸭、孔雀、鸵鸟和鹧鸪的平均血清阳性率分别为42．9％，25．1％，45．8％，47．6％和80．O％。APMV-2在我国不同类型鸡群(SPF鸡群除外)、不同品种鸡群有着100％的感染率。采用RACE技术获得了APMV-2病毒M基因的全编码序列。对M基因的序列分析结果表明，APMV-2病毒M基因的大小为1089bp，编码362个氨基酸，分子量约为39．727kDa。APMV-2病毒M基因与其它副粘病毒M基因的核苷酸和氨基酸序列同源性均较低，其中与APMV-6的同源性最高，同源性分别为43．88％和45％。利用纯化

3、的Yucaipa病毒免疫Balb／c小鼠，将免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0融合，制备得到了一株能分泌APMV-2血凝素特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株，代号为IG4A7。对单克隆抗体1G4A7的鉴定结果表明，该单抗的IgG亚类为IgGl，轻链类型为1(链。腹水中单克隆抗体1G4A7的ELISA效价为106，Hl效价为210。单抗1G4A7与其它常见禽类病毒没有交叉反应。对四株APMV．2国内分离株进行了研究，主要内容包括分离株病毒的形态学观察、血清学关系和抗原性差异分析以及F基因和HN基因的序列测定分析。电镜观察结

4、果表明，APMV-2分离毒在形态结构上与标准株Yucaipa没有明显的差异，病毒粒子一般呈球形或椭圆形，大小差别较大。采用HI和间接ELISA方法对APMV-2国内分离毒血清学关系和抗原性差异的分析结果表明，APMV．2国内分离株在血清学关系和抗原性关系上均存在一定的差异，其中国内鸡源分离株与Yucaipa病毒在血清学关系上更为密切。对APMV一2国内分离株的F基因和HN基因的序列分析结果表明，APMV-2各毒株间F基因和HN基因的核苷酸和氨基酸同源性均很高，个别核苷酸或氨基酸的变异有何意义仍需进一步研究。此外我们还对APM

5、V．2国内鸡源分离株F8和NK的致病性进行了初步研究，研究结果表明F8株病毒可以造成感染鸡气管的组织学损伤，但总体致病性较弱。关键词：禽副粘病毒2型，血清流行病学调查，cDNA末端快速扩增，单克隆抗体，分离株AbstractAvianparamyxovirusserotype2(APMV-21isoneoffamiliarpathogensonpoultryproductionandbelongstothegenusAvulaviruswithinthefamilyParamyxoviridae．Inthestudy,wer

6、eportedtheresultsofa3-yearserologicalsurveyperformedinvariousavianspeciesinChina,andsequencedfirstMgeneofAPMV-2．WealsopreparedthemonoclonalantibodiesofAPMV-2againsthemagglutininproteinandstudieddetailedlyonthefourisolatesofAPMV-2．Between2003and2005，atotalof9156sera

7、collectedwasscreenedusingthehaemagglutinationinhibition(HI)assay．TheaveragedseropositivityofAPMV-2forchickens，ducks，peacocks，ostrichesandpartridgesWas42．9％，25．1％，45．8％，47．6％and80．0％respectively．Amongthechickenflocksofdifferenttypeandbreeds，therateofinfectionforAPMV

8、-2Was100％,andSPFflockswerefoundtobenegative．TheresultsofserologicalsurveyindicatedthatthedistributionofAPMV一2isextremelywideinChina．Weclonedfirst