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1、第6卷第1期中国食品学报Vol.6No.12006年3月JournalofChineseInstituteofFoodScienceandTechnologyMar.2006水产品中致病微生物的快速检测方法杨文鸽孙翠玲潘云娣候温甫(宁波大学生命科学与生物工程学院宁波315211)摘要阐述几种水产品中致病微生物的快速检测方法,这些方法的应用和发展将为水产品的质量安全提供有利保障。关键词水产品致病微生物快速检测文章编号1009-7848(2006)01-0402-05水产品中的致病微生物包括以下几类:一是水大、检验周
2、期长(6~7d)、特异性不强等缺点,不能产品自身原有的细菌,这类细菌广泛分布于水中,达到新鲜水产品贮藏时间短、需要快速检测的要如冷源性细菌肉毒杆菌(ClostridiumBotulinum)和求。随着现代生物技术的发展,生物技术检测方法单核李斯特菌(Listeriamonocytosens),噬热性致病以其简单、快速、专一、微量、准确等优点,在水产菌如霍乱弧菌(Vibriocholerae)、副溶血弧菌品检测尤其是致病微生物检测方面显示了巨大的(Vibrioparahaemolybcus);二是人为污染的细菌,应
3、用潜力。本文简要论述了以DNA或免疫学为基主要存在于人和动物肠道内及被人或动物粪便污础,快速检测水产品中致病微生物的方法。染的水环境中,常见的有沙门氏菌(Salmonellussp.)、志贺氏菌(Shigellasp.)、大肠杆菌1聚合酶链式反应(PCR)技术(Escherichiacoli.)和金黄色葡萄球菌(Stapgycocus聚合酶链式反应PCR(PolymeraseChainaureas)等;此外还包括一类病毒,主要以双壳软体Reaction)是美国科学家Mullis于l983年发明的动物为载体,如甲型
4、肝炎病毒(Hepatitis-typeA,一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方HAV)、诺伏克病毒(NorwalkVivus)、雪山病毒法,故又称为基因的体外扩增法。它可以在试管中(SnowMountainAgent)、杯状病毒(Calicivirus)、建立反应,数小时后能将极微量的目的基因或某星状病毒(Astrovirus)、非甲非乙肝炎(Non-Aand一特定的DNA片段扩增数十万乃至千百万倍,即Non-B)病毒。可将皮克(pg)水平的DNA特异地扩增到能够检致病微生物可通过水产食品对人产生危害,测的
5、微克(μg)水平,无须通过繁琐费时的基因克表现为胃肠炎、腹泻、发烧、呕吐、败血症、痢疾等隆程序,便可以获得足够数量的精确的DNA拷主要症状。这些微生物所引起的食源性疾病是影贝。目前PCR技术已广泛应用于微生物病原的检响食品安全的主要因素之一。目前对水产及其加测、DNA多态性分析、基因克隆、基因分离、序列工品的微生物检验主要是针对一般的污染(如大分析等领域,同时也频繁地被应用于水产品中致肠杆菌、菌落总数)和致病菌(如沙门氏菌、副溶血病微生物的快速检测。性弧菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃氏菌等)。常规的霍乱弧菌、副溶血弧
6、菌及创伤弧菌是引起人微生物学检验通常以分离培养、生化试验及血清类肠道急性传染疾病的三大病原菌,也是国际检学试验来进行判断,具有操作复杂、手工劳动量验、检疫的重要菌株。钟凯[1]等利用副溶血性弧菌的tl基因为靶序列,设计1对引物,其PCR扩增产收稿日期:2005-08-25物具有极好的特异性,对人工污染的冷冻虾仁、沙基金项目:宁波市博士基金项目(No.2003A61020)丁鱼的检出低限达到10cfu/g。吴彩云等[2]以tl和作者简介:杨文鸽,女,1966年出生,副教授tdh为靶基因,以单引物对的常规PCR技术为
7、参第6卷第1期水产品中致病微生物的快速检测方法403照,对双重PCR(d-PCR)技术同时检测该两靶基增产物成正比,从而可以精确定量。实时荧光逆转因的可行性进行了研究,建立了一种快速、有效地录-PCR方法是在常规逆转录-PCR检测中加入1检测副溶血弧菌有毒菌株的分子生物学方法。许条荧光探针,无需电泳,不使用致癌物溴化乙锭,龙岩等[3]根据霍乱弧菌T139、ctxA、tcpA和副溶血对研究人员和环境更安全。同时它能实时检测,与性弧菌tdh基因,建立了利用多重-PCR(MPCR)电镜法、ELISA法、普通逆转录-PC
8、R法相比具有从罗飞鱼和牡蛎中快速检测霍乱弧菌和副溶血性敏感、特异和快速等特点。焦红[8]等以副溶血性弧弧菌的方法,探讨了运用该方法检测食品中霍乱菌的gyrase基因序列设计并合成特异性引物和荧弧菌和副溶血性弧菌的可能性。结果表明:MPCR光标记探针,建立了荧光定量-PCR技术检测冷冻用于污染的水产品检测,经过增菌培养,O1群霍虾、鱼片、鲈鱼、鳕鱼等水产品中副溶血性弧菌的乱
