《克隆抗体》PPT课件

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1、第一节动物细胞制药基础知识一、动物细胞的结构细胞膜细胞质细胞核亚细胞器无细胞壁第十二章单克隆抗体1二、动物细胞代谢葡萄糖和谷氨酰胺提供能量和合成代谢的前体葡萄糖受限谷氨酰胺谷氨酰胺：氮源，受限，消耗其他氨基酸葡萄糖代谢：进入糖酵解途径，大部分分解为丙酮酸乳酸，分泌到胞外（积累）丙酮酸还可以转化为乙酰辅酶A，进入TCA循环，彻底氧化为CO2和水4%-8%的少部分葡萄糖进入五糖磷酸途径PPP，转化为4、5、7碳糖和NADPH.5碳糖用于核酸合成，其他中间产物进入脂肪酸代谢、核酸代谢和氨基酸代谢。葡萄糖代谢旺盛，产生大量乳酸，产生细胞毒性。谷

2、氨酰胺代谢：进入氨基酸代谢途径，合成其他氨基酸大多数谷氨酰胺在脱氨酶作用下，生成谷氨酸，并释放氨，产生细胞毒性小部分谷氨酰胺通过转氨作用生成其他嘌呤、嘧啶和氨基糖。谷氨酰胺谷氨酸还原酶α-酮戊二酸TCA能量在快速生长的培养系中，转氨作用是主要代谢途径：谷氨酰胺与丙酮酸和草酰乙酸发生转氨作用丙氨酸和天冬氨酸葡萄糖代谢和谷氨酰胺代谢重叠于丙酮酸常流加葡萄糖代谢和谷氨酰胺，控制整个代谢，避免有毒废物积累2三、动物细胞的分类原代细胞（primarycell):从动物体内直接分离得到的细胞特点：生长分裂不旺盛，与体内细胞相似传代细胞（passag

3、ecell):原代细胞转接后培养的细胞特点：分裂增殖旺盛二倍体细胞系（diploidcell):原代细胞经过传代、筛选、克隆、纯化后，获得的具有一定特征的细胞系。如：W1-38,MRC-5,ZBS等有限细胞系(finitecell):生长和寿命有限的细胞系，二倍细胞系特点：多次传代培养，失去增殖能力，老化死亡（寿命取决于细胞来源的物种、年龄和器官）人细胞：50-60代，胚成纤细胞：人50代；鸡胚30代；小鼠8代3三、动物细胞的分类（二）无限细胞系(infinitecell):生长和寿命不受限制的细胞系，能连续传代培养。特点：细胞无限分裂

4、，不具有接触抑制现象，不出现异常染色体连续细胞系(continuouscellline)永久性细胞系（immortalcellline)异倍体工程细胞系（engineeredcellline):采用基因工程技术对宿主细胞的遗传物质进行修饰，获得具有稳定遗传的独特性状。获得方法：异倍体化，融合或重组转化细胞系：染色体断裂成为异倍体，失去了正常细胞的特点，具有无限增殖能力。特点：可长期培养，倍增时间短，对培养条件和营养要求较低，适用于大规模培养如：Namalwa,CHO,BHK-21,Vero细胞等。√√√4四、动物细胞培养的特性4.1.细

5、胞生长缓慢，分裂周期12～48h，易受微生物污染；4.2.动物细胞较微生物细胞大得多，无细胞壁，机械强度低，适应环境能力差；4.3.培养过程需氧量少，且不耐受强力通风与搅拌；4.4.在机体中，细胞相互粘连以集群形式存在，培养过程（电荷作用，钙镁离子作用）具有群体效应，锚地依赖性，接触依赖性及功能全能性；→接触抑制（contactinhibition）现象。4.5.培养过程产物分布于细胞内外，反应过程成本较高，但产品价格昂贵；（注：多数分泌胞外，收集纯化方便，得到较完善的翻译后修饰，特别是糖基化，与天然产品一致）4.6.大规模培养时，不可

6、套用微生物反应的经验；有限细胞系（finitecellline）5五、动物细胞的培养基组成与制备5.1.培养的环境因素温度（37±0.5）oC；渗透压（生理条件下）260～320mOsm/Kg氢离子浓度7.2～7.4，接近中性（不能超过6.8～7.6）其它有机离子主要代谢物补充的代谢物激素影响细胞代谢的其他因素细胞生长的基质各因素间的相互作用5.2.主要因素：培养基组成和浓度温度培养液的酸碱度溶解氧（O2、CO2）—95%空气，5%CO2混合气体，氧的传递非常困难（40%—50%）合适各种代谢物浓度65.3培养基组成5.3.1.AA；5

7、.3.2.维生素类；VB或VB+VC5.3.3.盐类Na+、K+、Mg2+、Ca2+、Cl-、SO42-、PO43-、HCO3-调节渗透压酸碱平衡、酶的活性等；5.3.4.葡萄糖—能量；5.3.5.缓冲系统—磷酸盐CO2→HCO3-；5.3.6.矿物质—来源于血清，无血清时，补充Fe2+、Cu2+、Zn2+、Se2+和其他稀有元素；5.3.7.有机补充物，如核苷类，TCA循环中间产物、丙酮酸盐、类脂等；5.3.8.激素如胰岛素、生长激素；5.3.9.生长因子类各来自于血清中，存在的是一些多肽；粘附因子，如纤维结合蛋白、胶原等。关键因素：

8、葡萄糖；谷氨酰胺；能源浓度高氧气7DMEM培养基（mg/L）L-盐酸Asg42，L-cys24，L-Asn584，L-盐酸His19，L-zle52，L-Leu52，L-盐酸Lys72，L-Met15，L-