单克隆抗体课件.ppt

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1、抗体制药第一节免疫学基础一、疫学有关概念抗原抗体免疫球蛋白免疫佐剂1.抗原1）概念抗原是指能刺激机体免疫系统发生免疫反应，并能与其产生的抗体和（或）致敏淋巴细胞在体内或体外发生特异性结合的物质2）抗原特性两个基本性质：免疫原性和反应原性3）抗原构成的条件A.异物性构成免疫原性的首要条件免疫系统对异物的识别功能，是机体在发育中建立起来的B.化学组成C.分子大小与其结构D.立体构象与易接近性E.其他条件受到免疫途径、剂量以及机体方面等因素的影响2.抗体抗体是机体免疫系统受抗原刺激后产生的一类能与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。3.免疫球蛋白免疫球蛋白的基本结构是四体

2、单链构成的单体人的免疫球蛋白有IgA、IgD、IgM、IgG、IgE在可变区中，某些特定区域的氨基酸显示出更大的变异性，称为高可变区，变化较少的部分称为骨架区高度可变区是免疫球蛋白分子与抗原决定族发生特异性结合的部位，又称为互补决定区（CDR）4.免疫佐剂与抗原同时或预先注射到机体内，能增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的物质，称为免疫佐剂。1）无机化合物2）人工合成的双链多聚核苷酸3）微生物及其产物4）油剂二、免疫系统1.免疫器官2.免疫细胞3.免疫分子第二节抗体药物概念及其特点一、抗体药物概念通过细胞工程或基因工程生产的，用于诊断或治疗的单克隆抗体、

3、抗体片段、基因工程改造的抗体或免疫偶联物统称为抗体药物二、抗体药物特点1.特异性1）与相关抗原的特异性结合2）对靶细胞的选择性2.多样性1）抗原多样性2）结构多样性3）抗体活性的多样性4）免疫偶联物和融合蛋白的多样性第三节杂交瘤技术与单克隆抗体1975年，德国学者Kohler和英国学者Milstein合作研究将经绵羊红细胞免疫后的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，建立了能持续分泌抗棉样细胞抗体的杂交瘤细胞，从而创立了具有划时代意义的新技术，为此获得了1984年医学诺贝尔奖一、抗体的种类1.多克隆抗体对克隆抗体含有两层意思：一是有含多个抗原位区的大分子刺激产生的、识

4、别不同抗原位区的各种抗体；二是由体内不同淋巴细胞产生的、可针对同一抗原位区的多克隆抗体。2.单克隆抗体仅识别抗原分子上同一抗原位区的由同一克隆细胞产生的抗体为单克隆抗体二、杂交瘤及杂交瘤技术细胞杂交的含义包括同一细胞的自融合或是在诱导物的作用下不同细胞间的融合淋巴细胞通过融合剂的作用和肿瘤细胞形成融合的杂交细胞称杂交瘤细胞通过肿瘤细胞和淋巴细胞的融合，用于某些细胞特性的研究和生产所期望的免疫分子，称为杂交瘤技术目前杂交瘤技术在免疫学领域的应用有两种B淋巴细胞杂交瘤，即用骨髓瘤细胞和B淋巴细胞进行融合而制备抗体，也是引用最广泛的一种T细胞杂交瘤技术，肿瘤细胞和T细

5、胞融合而制备具有免疫活性的淋巴因子通常人们所述的杂交瘤技术即知B淋巴细胞杂交瘤，也可称为单克隆抗体技术三、单克隆抗体单克隆抗体是由一个骨髓瘤细胞和一个具有分泌抗体能力的B淋巴细胞融合形成的杂交瘤细胞，通过无性繁殖形成的细胞系而获得的这个细胞系的每个细胞均具有相同的特性且高度均一，这一细胞系分泌的抗体均一性极高，活性、亚基、亲合力均相同单克隆抗体的特点抗体结构高度均一。抗体分子在结构上高度均一，甚至在氨基酸的序列和空间结构上都相同高度特异性。抗体识别的是抗原分子上单一的抗原位区稳定的生产特性。产生抗体的细胞是可以无性繁殖的细胞系第四节杂交瘤细胞系的建立一、免疫B淋

6、巴细胞的制备1.抗原凡是能具有抗原性质的物质均可制备单克隆抗体，抗原可以是全病毒、亚单位或纯化分子，也可以是蛋白质、多糖、脂类等用于制备单克隆抗体的抗原在理论上讲，纯度要求就可以不高，也可以使混合抗原2.免疫动物的选择目前常用的骨髓瘤细胞系来自BALB/c小鼠和Lou大鼠免疫方法A.体内免疫法B.脾内免疫法C.体外免疫法二、骨髓瘤细胞的选择在B淋巴细胞杂交瘤技术中，主要是用多发性骨髓瘤细胞作为亲本细胞，这种细胞是来自骨髓造血细胞的一种肿瘤，分泌单一抗体的浆细胞，并且衰变成不表达自身抗体或部分表达常见的骨髓瘤亲本细胞系有Sp2/0，NS-1，Y3，YB2。三、免疫

7、脾细胞的制备经免疫的BABL/c小鼠或Lou大鼠，摘眼球、断颈等方法处死后，无菌摘取脾脏，研磨制取B淋巴细胞悬液，经氯化铵破碎红细胞后，洗涤并调整到（1～5）X107个／ml浓度备用四、细胞融合将免疫脾B淋巴细胞和骨髓瘤细胞按照（5～10）：1混合后离心取上清，缓慢加入分子量在4000～6000的50％PEG1ml，间隔1分钟后，缓慢加入无血清培养基，终止融合剂的作用，经洗涤去除融合剂后加入细胞培养液，分种于96孔板中五、特异杂交瘤细胞的选择1.杂交瘤细胞的选择融合后，有杂交瘤细胞有骨髓瘤－B淋巴细胞、B淋巴瘤细胞－B淋巴瘤细胞、骨髓瘤细胞－骨髓瘤细胞，还有未融

8、合的骨髓瘤细胞和B淋巴细