《多糖药物检测方法》PPT课件

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1、多糖药物检测方法1、硫酸软骨素的含量测定酸性粘多糖，维持组织和免疫机能（1）长期应用于防治冠心病、心绞痛、冠状动脉粥样硬化、心肌缺血等疾病，无明显的毒副作用。在动脉和静脉壁上沉积的脂肪等脂质可以被有效地去除或减少，能显著降低血浆胆固醇。（2）用于治疗神经痛、神经性偏头痛、关节痛等。（3）预防和治疗链霉素引起的听觉障碍，效果显著。（4）应用于化妆品以及外伤伤口的愈合剂等。（5）鲨鱼软骨中的软骨素有抗肿瘤的作用。（6）硫酸软骨素还用于滴眼剂。家畜、鲨鱼类动物是主要的软骨来源。但家畜的软骨产量很低，鲨鱼多是靠天然捕获。因此,需要进一步寻求其它易得而又稳定的软骨来源,。鲟鱼的软骨含量相当高,而且鲟鱼养

2、殖技术已成熟。以匙吻鲟的软骨为原料,用稀碱-酶相结合的方法提取硫酸软骨素匙吻鲟软骨→80℃恒温蒸煮6h→洗净→冷冻→80℃烘干→粉碎→料液比1∶6，3%碱提取，提取温度40℃→滤液→胰蛋白酶酶降解（用量1000∶1.5，酶解温度45℃）→氯仿萃取→弃氯仿层→95%乙醇沉淀（沉淀时的pH7.0）→过滤→60℃干燥→成品硫酸软骨素提取率为36.52%、纯度为97%、蛋白质含量为0.075%、水分为10.52%。检测方法（1）比色法适量样品用6MHCL酸水解2小时，中和与乙酰丙酮反应25分钟，生成色原物质，冷却，然后再与无醛乙醇60℃反应1小时，525nm处测定吸光度,盐酸氨基葡萄糖做对照(2)紫外

3、法样品与硫酸95℃共热水解1小时,288nm处测吸光值。需做标准曲线（3）毛细细管电泳测定硫酸软骨素毛细管电泳条件：毛细管内径50μm；有效长度50cm缓冲盐：50mM磷酸二氢钾溶液，pH=3.5进样量：5sec,0.5毫升分离电压：28kV样品处理：称取各种待测样品约1.0g，用10mL乙腈分散，定容至100mL。氨基葡萄糖标准曲线（5.070mg/mL-0.507mg/mL）：y=8338.7x+1607.7，R2=0.9999硫酸软骨素标准曲线（4.731mg/mL-0.473mg/mL）：y=344781x+58652，R2=0.9958香菇多糖的测定香菇多糖是主链是β（1→3）糖苷链

4、连接的葡聚糖。用这种多糖以2mg/kg剂量腹腔注射已移植肿瘤的大鼠连续5天，结果表明它对肉瘤的抑制率达83%，而相同剂量的经切支水解后得到的较小分子香菇多糖对肉瘤的抑制量更高，达97%以上。机理：有人合成了含有同位素的香菇多糖，并在移植了肿瘤的小鼠身上做示踪试验，结果发现它不具备直接杀伤肿瘤细胞的能力。随后的大量试验表明它是作为调节机体免疫反应的T细胞促进剂，通过刺激抗体的产生提高机体的免疫能力，从而达到抵抗肿瘤的作用。香菇多糖注射液(治慢性肝炎及肿瘤治疗的辅助药);香菇多糖的测定多糖水解成单糖进行测定（滴定法）含量=样品水解后单糖总含量-未水解样品中单糖的含量香菇多糖的提取方法1.预处理：取

5、干香菇，捣碎。2.提取：将捣碎的干香菇，在搅拌的条件下加6—7倍量水混匀，加热至90℃，搅拌保温60min。降温至40℃时转移到40℃水浴保温，pH6．4，搅拌反应60min，然后迅速升温到90-100℃，灭活1min降温后纱布过滤，收集滤液。3.浓缩：将以上滤液浓缩至l/5体积。4.沉淀：将浓缩液加1倍量乙醇，然后静置过夜。过滤得沉淀物，滤液再加3倍量乙醇，得沉淀物。5.二次沉淀：将沉淀物置于搪瓷缸中，加约70倍量的水，搅拌均匀，在猛烈搅拌下，滴加0.2mol/L氢氧化十六烷基三甲基胺水溶液，逐步调PH至12.8时产生大量沉淀，离心，沉淀用乙醇洗涤，收集沉淀。6.除蛋白：沉淀用氯仿、正丁醇洗

6、涤去蛋白，水层加3倍量乙醇沉淀，收集沉淀。7.洗涤：沉淀依次用甲醇、乙醚洗涤，收集沉淀。8.干燥：将沉淀置真空干燥器干燥，即为香菇多糖。灵孢多糖灵芝，又称万年蕈、灵芝草，为灵芝属真菌,有着悠久的药用历史。目前，有关灵芝活性元素的研究主要集在：灵芝多糖类、灵芝三萜类等成分上。灵芝多糖可抑制肿瘤细胞的无限、快速分裂能力，还具有提高机体免疫力，提高机体耐缺氧能力，降血糖降血脂作用。灵芝多糖产品：灵芝多糖片、灵芝复方糖浆等(主要用于肿瘤辅助治疗，慢性气管炎、高血压、神经衰弱、糖尿病、高血脂等);检测方法(1)对照品溶液的制备取葡萄糖，加水制成1.0mg/ml的溶液。(2)供试品溶液的制备取本品3.0m

7、l，加水定容至200ml。(3)标准曲线的制备精密量取对照品溶液1.0ml，2.0ml，4.0ml，6.0ml，和8.0ml，加水定容至100ml。各精密量取1.0ml，分别置具塞试管中，置冰浴中，分别加入蒽酮试剂5.0ml，摇匀，各试管加完后浸入沸水浴中，加热1min后，加塞。自水浴重新沸腾起，开始计时，10min后取出，用自来水冷却，室温放置10min，立即在620nm分别测定吸光度，以测得的