酪蛋白磷酸肽(CPP)制取、理化特性及其促铁吸收的研究

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1、东北农业大学硕士学位论文酪蛋白磷酸肽(CPP)制取、理化特性及其促铁吸收的研究姓名：牟光庆申请学位级别：硕士专业：动物食品科学指导教师：骆承庠19991101牟光庆摘要1999年12月摘要酪蛋白磷酸肽(cPp)是极具研究开发价值的生物活性肽。本课题对CPP制取工艺条件、产品检测、粗品脱苦方法、产品理化特性、促铁吸收效果等进行了全面深入的研究。1．利用胰蛋白酶水解酪蛋自制取CPP。采用二次旋转回归设计研究了底物浓度为15％，水解1小时时酶一底物浓度比([E]／[S])、pH值和温度(T)三个因素对水解度(DH)的影响，建立了数学模型。‘以NIP

2、、CPP得率为评定指标确定了最优水解工艺条件：[EJ／[S]=0．82％、pH=7．5T=48℃、t=2hr，得出最适水解度为95％及最佳分离条件：调节pH=6．5，加CaCl：、乙醇后静置4—8hr所得产品NIP摩尔比为7．58—7．65、CPP得率16．1％一16．5％。首次探讨了通过先进的毛细管区带电泳(c8pillawzoneelectrophoresis，简称CZE)法对CPP样品进行分离和含量测定的可行性。研究出适宜的电泳操作条件为：工作电压30KV、柱温25℃、毛细管长度50cm、内径70tan、进样量5sec(气压进样)、紫外

3、检测波长200nm、运行缓冲液pH值9．2。测定CPP含量约为50％一51％。“。2．对cPP粗制品脱苦方法进行了研究of结果表明口一CD包埋效果不理想；3．5％粉末状活性碳、0．5％除苦剂都能达到彻底脱苦的目的．但活性碳脱苦氮损失达16．1％。3．cPP溶解性．除在pH40时为90％外，其它均高于90％，且具有随pH值增大而增加的特性。其泡沫体积能达到起始体积的3．80倍，约是酪蛋白的ll倍。在pH2．0～9．0时，其浊度低于0．07，具有透明度好、且随pH值升高浊度降低的特性。CPP对热及ca2+具有较好的稳定性。其乳化力较酪蛋白下降了约

4、20％，乳化性下降2．89％，乳化稳定性下降1．45倍。1o4．首次对CPP促铁吸收进行了深入系统的研究。』体外消化试验表明cPP能显著提高Fecl3溶液中F分+的溶解性(P<001)，并显著促进F分+还原为F-e2+(P<0．05)，上述作用受cPP浓度和纯度影响较大，受pH值影响不显著(P>0．05)。加入cPP使可溶性铁和二价铁的透析率均显著高于对照组(P<0．01)。动物试验表明：加入硫酸亚铁和0．1％CPP+硫酸亚铁的饲料对贫血大鼠血红蛋白、红细胞数及血细胞压积的影响比缺铁性饲料喂饲大鼠的血液指标有显著影响(P<001或P

5、)。且缺铁性贫血的大鼠血液指标恢复较好，分别达到112．6g／L、159．1g／L；7．94×108／L、8．78×10”／L；40．76％、4759％，并且CPP和硫酸亚铁同时添加组的效果优于添加硫酸亚铁组的效果。下1关键词：酪蛋白磷酸肽水解度脱苦促铁吸收肽理化特性毛细管区带电泳硕士学位论文酪爱白磷酸肽(cer,)制取、理化特性及其促进铁吸收的研究东北农业大学第一章前言具有生物活性的多肽，特别是短肽的发现和研究已经成为多肽类药物和功能性食品添加剂开发和研究的热点。近年来，已经有很多具有生理活性的多肽通过蛋白消化而辨认出来”““。这些生物活性

6、肽都以非活性状态存在于蛋白质的长链之中，当用适当的蛋白酶水解时，它们的活性就被释放出来。这些生物活性肽中，研究最多的是酪蛋白磷酸肽(Caseinphosphopeptides，简称cPP)，由于它具有很强的促钙、促铁吸收活性，在国际上倍受人们关注。日本和德国已经开发出功能性食品上市。1998年，德国开发出药物，并将其列入药典。我国对其开发研究正方兴未艾，发展前景极其广阔。l国内外CPP研究动态l1CPP的结构和功能cPP是以牛乳酪蛋白为原料，经单一酶或复合酶水解，再经分离而得到的含有连续磷酸丝氨酰基和谷氮酰基的肽。酪蛋白占牛乳蛋白质的80％，

7、它含有％、％、B和K四种主要成分，其比例为34：8：36：9，它们的一级结构已被确定。除K酪蛋白外，其余酪蛋白都含有成簇的磷酸丝氨酰基和谷氨酰基”1。经酶消化产生的CPP的功能区结构主要有m，(43—58)2P、d。l(59—79)5P、％(46—70)4P、口(1—25)4P、B(1—28)4P和p(33—48)l∥⋯⋯，见表1一l。表1—1嘲酪蛋白经水解后所含酪蛋白磷酸PZt(CPP)的结构nlale1—1StructureofCPPafterCaseinHydMysis酪蛋白水解陡主要晌磷胜臆a4563“sl一酪蛋白一Gly—Set—G

8、lu—Ser—Thr．．．Glu—Ser—ILe-Ser—Set—Ser—Glu—P03，0“靶一酚蛋白一GIv—Ser—Ser—Ser—GIuGlu—Ser—Al