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1、第35卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第9期2007年9月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1365~1368茶叶中总黄酮含量测定方法的研究*何书美刘敬兰(河北师范大学实验中心,石家庄050016)摘要茶叶中富含羟基苯甲酸类、肉桂酸类及原花色素等多酚类物质,这些物质都具有邻苯二羟基结构,碱性环境下与铝离子形成络合物,影响总黄酮的测定。本实验用亚硝酸钠硝酸铝法和三氯化铝法测定茶叶总黄酮含量的结果作了比较。实验结果表明,亚硝酸钠硝酸
2、铝法的测定结果比三氯化铝法约高60mg/g,三氯化铝法在酸性环境下进行,酸度实验显示,适宜酸度为pH5.0。鞣酸干扰实验表明,平均误差为0.017mg,随着鞣酸量的增加,测得值无上升趋势。三氯化铝法的线性方程:y=0.000638+0.8623x,相关系数:r=0.9998;样品加标回收率为98.05%。因此,对含酚类较多的植物应采用三氯化铝法测定其总黄酮的含量。关键词亚硝酸钠硝酸铝法,三氯化铝法,总黄酮,茶多酚,茶叶1引言茶叶作为中华民族的传统保健饮料已有四五千年的历史,开发茶叶的新用途,开展茶叶的综合利用,尤其是利用
3、低档茶叶或茶叶加工的下脚料来生产高附加值的精细化学品,是一个具有重要意义的研[1~3][4][5]究课题。黄酮含量测定的方法有多种,如紫外区直接测定法(不同峰位)、可见区络合法、液相[6,7][8][9]色谱法、荧光法、化学发光法等。用于测定总黄酮的方法常见的是前两种,液相色谱主要应用于单一黄酮化合物的测定。紫外区直接测定总黄酮的方法与被测液的基底(苯类,共轭烯烃等)有很大关系,因此容易产生误差。络合法与直接测定法不同,其化学原理为,金属离子与酮羰基、邻位羟基形成配位化合物,使吸收带发生位移,从而克服了被测液基底的影响,可见区络合
4、法与被测液的成分也有很大关系,络合剂及酸度的选择非常重要。由于茶汤的颜色较重,茶多酚含量高,因此,不适宜的测定方法会造成较大的误差。本研究对最常见的可见区亚硝酸钠硝酸铝法与可见区三氯化铝法进行了比较,方法偏差约为60mg/g,亚硝酸钠硝酸铝法产生偏差的因素系茶多酚中邻位二羟基。我国茶区辽阔,茶产量亦逐年增加且品种繁多。碎末茶以及副茶、边茶、材茶、茶梗等茶叶下脚料数量较大,利用茶叶下脚料提取黄酮,开发前景十分广阔。适宜的测定方法则更为重要。2实验部分2.1仪器与试剂M1730型傅立叶变换红外光谱仪和17型紫外可见分光
5、光度计(美国PE公司);PHS3C11A型精密PH计(中国上海雷磁新泾仪器公司)。芸香叶苷(芦丁):(标准试剂)北京化学试剂公司。实验用茶叶均为市售:碧螺春产地江苏;龙井产地杭州;铁观音产地福建;大红袍产地武夷山;白毫产地福建。2.2两种黄酮的测定方法2.2.1亚硝酸钠硝酸铝法精密称取105下干燥恒重的芦丁纯品0.1000g,用50%的乙醇溶解,摇匀,定容至100mL,再取10mL此标准液于100mL容量瓶中,稀释、定容为0.1g/L的芦丁标准品溶液,作为贮备液备用。分别吸取上述芦丁标准液0.00,0.25,0.5
6、,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mL于10mL比色管中,用50%乙醇稀释至5.00mL,分别加入5%(g/L)NaNO2试液0.3mL,摇匀,静置6min。再加5%(g/L)Al(NO3)3试液0.3mL,摇匀,静置6min,再加4%NaOH4mL,并用50%乙醇水溶液定容至刻度,摇匀,静置12min。于504nm处测试,以吸光度值为纵坐标,以显色液中芦丁的质量(mg)为横坐20060914收稿;20070421接受本文系河北省教育厅(No.2004325)和河北师范大学(No.L2005Y13)基金资助项目*E
7、mai:lhsm63@163.com1366分析化学第35卷-2标,用最小二乘法进行回归,线性方程:Y=4.07110+0.1159X,相关系数r=0.9992。2.2.2三氯化铝法分别精密吸取上述芦丁标准液0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0mL于25mL的比色管中,加入1.5%AlCl38mL和醋酸醋酸钠的缓冲液(pH5.5)4mL,并用50%乙醇水溶液定容至刻度,摇匀,静置0.5h。于415nm下测试,以吸光度值为纵坐标,以显色液中芦丁的质量(mg)为横坐标,用最小二乘法进行回归,线性方程为Y=0
8、.000638+0.8623X,r=0.9998。2.3茶叶样品处理茶叶:碧螺春,市售,产地江苏;龙井,市售,产地杭州;铁观音市售,产地福建。准确称取1.0000g干燥并研碎的茶叶于锥形瓶中,按170的固液比,加入50%乙醇溶液,80水浴提取
