实验9-过氧化氢酶活性测定

《实验9-过氧化氢酶活性测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、实验10过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）一实验目的掌握和学习测定过氧化氢酶活性的原理和方法；2了解过氧化氢酶的作用。二实验原理过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢既是氧化剂又是还原剂。可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。即可求出消耗的H2O2的量。反应式5H2O2+2KMnO4+4H2SO45O2+2KHSO4+8H2O+

2、2MnSO4三实验器材10%H2SO4；0.2mol/LpH7.8磷酸缓冲液；0.1mol/LKMnO4标准液：称取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000mL，再用0.1mol/L草酸溶液标定；0.1mol/LH2O2：取30%H2O2（17.6mol/L）溶液5.68mL，稀释至1000mL，用标准0.02mol/LKMnO4溶液（在酸性条件下）标定。1试剂2材料:小麦叶片3主要设备：离心机，恒温箱，酸式滴定管四方法步骤1、酶液提取取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中

3、，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000转离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。2、滴定：取50mL三角瓶3个（2个测定，另1个为对照），测定瓶中加入酶液2.5mL，对照加煮死酶液2.5mL，再加入0.1mol/LH2O22.5mL，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10%H2SO42.5mL。3、用0.1mol/LKMnO4标准溶液滴定，至出现粉红色（在30s内不消失）为终点。5实验结果酶活性：每g鲜重样品1min内分解H2O2的mg数表示式中：A－对照KMnO4滴定mL数；B－酶反应后

4、KMnO4滴定mL数；VT－提取酶液总量（mL）；VS－反应时所用酶液量（mL）；W－样品鲜重（g）；T－反应时间（min）；1.7－1mL0.1mol/LKMnO4相当于1.7mgH2O2。六思考题简述测定过氧化氢酶的生理意义？下周实验：实验36谷物种子萌发时淀粉酶活力的测定