萌发小麦种子中淀粉酶酶学性质研究87702419

《萌发小麦种子中淀粉酶酶学性质研究87702419》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、萌发小麦种子中淀粉酶酶学性质研究（黑龙江省哈尔滨市东北农业大学邮编：150030）摘要：测定萌发小麦种子中淀粉酶的活性并对淀粉酶的活性影响因素进行讨论，对淀粉酶活性的测定是通过测定淀粉酶分解淀粉所得产物——麦芽糖的量来表示酶的活性。麦芽糖能和3,5-二硝基水杨酸还原成棕红色的氨基酸化合物（540nm出有最大吸收峰），其颜色与麦芽糖浓度成正比，利用分光光度计测定棕红色氨基酸化合物吸光值，从而得到麦芽糖的量，来表示酶的活性。定性分析了温度，PH值及激活剂和抑制剂对淀粉酶活性的影响（利用分解剩余的淀粉和碘液呈蓝色的程度来比较）。由此得到最适宜的温度和PH值，以及抑制剂的种类。关键词：淀粉酶、温度、P

2、H、淀粉酶活度、抑制剂、激活剂。本实验以萌发的小麦种子为材料，提取得到了淀粉酶，利用α-淀粉酶和β-淀粉酶的活性对温度的差异，分离出α-淀粉酶，并测定了α-淀粉酶的活性和α-淀粉酶和β-淀粉酶的总活性，计算出β-淀粉酶得活性，然后对淀粉酶活性影响因素进行了讨论。不同温度、PH值条件下和抑制剂情况下淀粉酶对淀粉水解的程度不同通过定性的分析温度、PH值和抑制剂对淀粉酶活性的影响。由此得到酶活性的最适宜的温度和PH值，以及抑制剂的种类。1材料与方法1.1材料实验材料为小麦（TriticumaestivumL.），由东北农业大学生命学院生化教研室提供。1.2方法1.2.1淀粉酶粗酶液的提取称取2g萌发

3、3天的小麦种子，置于研钵中，加入少量石英砂和2mL蒸馏水，研磨匀浆。将匀浆到入刻度试管中，定容至25.00mL。提取液在室温下放置提取15-20min，每隔数分钟搅动一次，使其充分提取。然后在4000r/min转速下离心10min，将上清液倒入一个干净的试管中，即为淀粉酶粗酶液。1.2.2温度对淀粉酶活性的影响取8支试管，编号，按下表操作，并记录观察到的颜色。温度对淀粉酶活性的影响管号AABBCCDd缓冲液（PH5.6）/mL1111淀粉溶液/mL2.52.52.52.5淀粉酶提取液/mL111预保温/min4℃室温40℃沸水浴混合A倒入a中B倒入b中C倒入c中D倒入d中酶促反应（10min）

4、4℃室温40℃沸水浴碘液各3滴（滴管应先冷却至室温）显色1.2.3pH对淀粉酶活性的影响取3支试管，编号，按下表操作，并记录观察到的颜色。PH对淀粉酶活性的影响管号123缓冲液/mL2（PH3.0）2（PH5.6）2（PH8.0）淀粉溶液/mL2.5淀粉酶提取液/mL1酶促反应（10min）摇匀，40℃水浴10min碘液3滴显色1.2.4激活剂和抑制剂对淀粉酶活性的影响取4支试管，编号，按下表操作，并记录观察到的颜色。激活剂抑制剂对淀粉酶活性的影响管号1234缓冲液（PH5.6）/mL2NaCl溶液/mL1CuSO4溶液/mL1Na2SO4溶液/mL1H2O1淀粉溶液/mL2.5淀粉酶提取液/

5、mL1酶促反应（10min）摇匀，40℃水浴10min碘液3滴显色1.2.5小麦种子淀粉酶比活力的测定取6支试管，编号，按下表操作。酶活力的测定操作项目α-淀粉酶活力测定β-淀粉酶活力测定Ⅰ-1Ⅰ-2Ⅰ-3Ⅱ-1Ⅱ-2Ⅱ-3淀粉酶原液/mL111000钝化β-淀粉酶置70℃水浴15min，冷却淀粉酶稀释液/mL000111缓冲溶液/mL向各试管中加入PH5.6柠檬酸缓冲液NaOH溶液/mL4004001%淀粉溶液/mL222222保温在40恒温水浴中准确保温5minNaOH溶液/mL044044取出上述各刻度管中试液各2mL，加入2mLDNS和上次实验空白调零的试管一起放入沸水浴中加热5min

6、，然后取出定容至25mL，摇匀，在520nm分光光度计上比色。2结果2.1温度对淀粉酶活性的影响分析：淀粉酶的最适温度是40℃。2.2pH对淀粉酶活性的影响分析：pH=5.6是小麦淀粉酶的最适PH。2.3淀粉酶活性的影响分析：NaCl使淀粉酶的活性增强CuSO4使淀粉酶活性减弱。3.讨论1、温度、环境PH值、激活剂、抑制剂是影响酶活性的几个重要因素，研究其中一个因素对酶活性的影响时，要控制其他因素不变（其他因素尽量控制在使酶活性最高的水平上），从而研究这一单一因素对酶活性的影响。2、通过对淀粉酶活性初步研究,说明温度、PH、激活剂、抑制剂是影响淀粉酶活性的重要因素。在一定温度范围内，淀粉酶的活

7、性随温度的升高而增强，当达到某一温度（40℃左右）时，酶的活性达到最大，当超过这一温度后，酶的活性随温度的升高而减弱;在一定PH范围内，酶的活性随PH的升高而升高，当达到某一PH（5.6左右）时，酶的活性达到最大，当超过这一PH时，酶的活性随PH的升高而降低，直到失去活性；Cl-使酶的活性增强Cu2+使酶活性减弱[3]。3.1意义研究酶有重要的意义。生物体内的各种代谢变化都是由酶驱动的,酶有两种功