萌发小麦种子中淀粉酶酶学性质研究

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1、萌发小麦种子中淀粉酶酶学性质研究Enzymaticpropertiesofthediastasefromgerminantwheat（黑龙江省哈尔滨市东北农业大学邮编:150030）扌商要：定量测定萌发小麦种子中淀粉酶（a-淀粉酶和金酶）的活力并对淀粉酶酶学性质的影响因素进行讨论，测定淀粉卿活性的方法是通过测定其产物麦芽糖的量来农示酶的活性。原理为麦芽糖能和3,5-二硝基水杨酸还原成棕红色的氨棊酸化合物（540nm出冇最大吸收峰），具光密度值与麦芽糖浓度成正比，从而得到麦芽糖的量，來表示酶的活性。定性分析了温度，PH值及激活剂和抑制剂对淀粉酶活性的影响。由此得到最适宜的温度和

2、PH值，以及抑制剂的种类。关键词：淀粉陆、温度、PH、抑制剂、激活剂、抑制剂本实验以萌发的小麦种了为材料，提取得到了淀粉酚，利用淀粉酶和B-淀粉酶的活性对温度的差异，分离出a-淀粉酶，并测定了淀粉酶的活性和全酶的总活性，然后对淀粉陆活性影响因素进行了讨论。不同温度、PH值条件下和抑制剂情况下淀粉酶对淀粉水解的程度不同通过定性的分析温度、PH值和抑制剂对淀粉酶活性的影响。曲此得到酶活性的最适宜的温度和PH值，以及抑制剂的种类。1材料与方法1.1材料实验材料为小麦（TriticumacstivumL.）o1.2方法1.2.1麦芽糖标准曲线的绘制取7支T•净的刻度试管，编号，按表加

3、入试剂管号1234567麦芽糖标准液/ml00.20.61.01.41.82.0蒸馅水ml2.01.81.41.01.60.20麦芽糖含量/mg00.20.61.01.41.82.03,5-二硝基水杨酸/ml2.02.02.02.02.02.02.0摇匀，逻沸水浴煮沸5mino取出后定容至25ml,冷却。以1号作为空白调零点，在540nm波长下测光密度值。以麦芽糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线。1.2.2淀粉酶粗酶液的提取称取1.2g萌发3d的小麦种了，置于研钵中，加入少量石英砂和加I，蒸憎水，研辭匀浆。将匀浆到入刻度试管屮，定容至25mL0提取液在室温下放豐提取

4、15-20min,每隔数分钟搅动一次，使其充分提取。然麻在4000r/min转速下离心lOmin,将上清液倒入一个干净的试管中，即为淀粉mm液。1.2.3酶活力的测定取六支T•净试管，编号，按表加入试剂«-淀粉酶活力测定总酶活力测定T-1T-2T-3TI-1TT-2TT-3淀粉酶原液/ml1.01.01.0000钝化B-淀粉酶置7(rc水浴15min,冷却淀粉酶稀释液/沁0001.01.01.03,5-二硝基水杨酸/ml2.0002.000预保温将各试管和淀粉溶液置于40°C恒温水浴中保温10min1%淀粉稀释液1.01.01.0L01.01.0保温在40°Cfe温水浴屮保温

5、5min3,5-二硝基水杨酸/ml02.02.002.02.0将各试管摇匀，显色后进行比色测定光密度，记录测定结果，操作同标准曲线1.2.4温度对淀粉酶活性的影响取8支试管,编号,按下表操作,并记录观察到的颜色。温度对淀粉酶活性的影响管号AABbCcDD缓冲液(PH5.6)/mL1111淀粉溶液/mL2.52.52.52.5淀粉酶提取液/mL1111预保温/min4°C室温40°C沸水浴混合A倒入a中B倒入b中C倒入c中D倒入d中酶促反应(lOmin)4°C室温40°C沸水浴碘液各3滴(滴管应先冷却至室温)1.2.5pH对淀粉酶活性的影响取3支试管，编号，按下表操作，并记录观

6、察到的颜色。PH对淀粉酶活性的影响管号123缓冲液/mL2(PH3.0)2(PII5.6)2(PH8.0)淀粉溶液/mL各2.5淀粉酶提取液/mL各1酶促反应(lOmin)摇匀,40°C水浴lOmin碘液各3滴1.2.6激活剂和抑制剂对淀粉酶活性的影响取4支试管，编号，按下表操作，并记录观察到的颜色。激活剂抑制剂对淀粉酶活性的影响管号1234缓冲液(PH5.6)/mL各2NaCl溶液/mL1-一—CuS04溶液/mL-1-—Na2S04溶液/mL--1—H20——_1淀粉溶液/mL各2.5淀粉酶提取液/Ml各1酶促反应（lOmin）摇匀，40°C水浴lOmin碘液各3滴2结果

7、1.1标准曲线的绘制淀粉酶活力的测定麦芽糖含量2.2酶活力的测定1-11-21-3光密度值0.1890.3320.334II-1II-2II-3光密度值0.1990.4000.394a-淀粉酶二［（A-A，）*稀释倍数*定容体积］/［样殆重札］全淀粉酶二［（甘B'）*稀释倍数*定容体积］/［样品重孔］查标准曲线得B=2.44B'=1.07A=2.067A'=1.218「淀粉酶二［(A-A，)*稀释倍数*定容体积］/［样品重札］=［(2.607-1.218)*8*25］/(2*1・2)=70.75全淀粉酶