萌发小麦种子淀粉酶酶学性质研究

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1、萌发小麦种子淀粉酶酶学性质研究陈晓蒙（东北农业大学生命科学学院，哈尔滨，150030）摘要：本研究以萌发的小麦种子为材料，提取得到淀粉酶液。利用分光光度计法测定淀粉酶分解淀粉所得还原糖与3,5-二硝基水杨酸的还原产物的吸光值，从而得出酶活标准曲线。根据α-淀粉酶和β-淀粉酶对温度的差异，采用加热的方法钝化β-淀粉酶，测定出α-淀粉酶的活性。在非钝化条件下测定淀粉酶的总活力。将小麦分为种子、芽和整个小麦分别来测定。研究影响淀粉酶活性的因素，在不同温度、不同pH值、激活剂和抑制剂的条件下由酶反应混合

2、物遇碘呈现的颜色判断出酶活性的的最适温度为40℃，最适pH值为5.6，NaCl为激活剂，CuSO4为抑制剂。通过研究淀粉酶的性质使我们更充分地了解，并利用于工业生产、食品加工、医疗等产业。关键词：淀粉酶活力温度PH激活剂和抑制剂TheenzymaticpropertiesofamylaseinWheatSeedGerminationXiaomengChenNortheastAgriculturalUniversityBiologicalSciences1301Zip.Code:150030引言：

3、酶是一种具有催化活性的蛋白质，由氨基酸通过肽链连接而成，只有在适当的温度pH和离子强度下才具有生物活性。而且生物体内的各种代谢变化都是由酶驱动的，酶既能催化各种生化反应，还能调节和控制代谢的速度、方向和途径，是新陈代谢的调节元件。淀粉酶广泛分布在植物和动物体内，特别是萌发谷物种子。它具有水解淀粉的能力，对生物有很大的影响作用。而淀粉是植物最主要的储藏多糖，也是人和动物的重要食物和发酵工业的基本原料。因此研究淀粉酶有重要的意义。现代酶学正向着两个方向发展：酶的分子生物学和酶工程学，它们是现代生物技

4、术的重要组成部分，应用范围包括药学、食品、化学工业、诊断分析和生物传感器，涉及的品种不少，如淀粉酶，其市场需要生产规模和产业均很乐观，并已产生巨大经济效益。1材料与方法1.1材料萌发的小麦种子（芽长约1cm）1.2方法1.2.1麦芽糖标准曲线的制作取7支干净的具塞刻度试管，编号，1-7号试管加入麦芽糖标准溶液分别为0、0.2、0.6、1.0、1.4、1.8、2.0ml，再分别加入蒸馏水2.0、1.8、1.4、1.0、0.6、0.2、0ml，使得1-7号试管中麦芽糖含量分别为0、0.2、0.6、1

5、.0、1.4、1.8和2.0mg。再分别加入10g·L-13,5-二硝基水杨酸2.0ml，将各试管置于沸水浴中加热5min，取出后冷却至室温，用蒸馏水定容至20ml。用1号试管做对照组，空白调零，在520nm下，分别测定2-7号试管的吸光值A。以麦芽糖含量（mg）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。1.3.1淀粉酶活力的制备与测定称取1g萌发的小麦种子不同部位，置于研钵中，加少量石英砂和2ml蒸馏水，研磨匀浆，用6ml蒸馏水粉刺将残渣洗入离心管。提取液在室温下放置提取15—20min,每隔数

6、分钟搅拌一次，使其充分提取。然后在4000r/min转速下离心10min，将上清液倒入250ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，即为淀粉酶原液，用于淀粉酶活性的测定。吸取上述酶原液1ml，放入25ml容量瓶中，定容摇匀，即得到淀粉稀释液。1.3.2α-淀粉酶活力的测定：取3支干净试管，编号，1号加入1.0ml淀粉酶原液，置于70摄氏度水浴15min，冷却，将各个试管和淀粉溶液置于40摄氏度恒温水浴中保温10min，加入PH5.6的缓冲溶液1.0ml，0.4MNaOH溶液4.0ml，1％淀粉溶

7、液2.0ml，在40摄氏度恒温水浴中准确保温5min，保温过后加入0.4MNaOH溶液0.0ml；2号加入1.0ml淀粉酶原液，置于70摄氏度水浴15min，冷却，将各个试管和淀粉溶液置于40摄氏度恒温水浴中保温10min，加入PH5.6的缓冲溶液1.0ml，0.4MNaOH溶液0.0ml，1％淀粉溶液2.0ml，在40摄氏度恒温水浴中准确保温5min，保温过后加入0.4MNaOH溶液4.0ml；3号加入1.0ml淀粉酶原液，置于70摄氏度水浴15min，冷却，将各个试管和淀粉溶液置于40摄氏度

8、恒温水浴中保温10min，加入PH5.6的缓冲溶液1.0ml，0.4MNaOH溶液0.0ml，1％淀粉溶液2.0ml，在40摄氏度恒温水浴中准确保温5min，保温过后加入0.4MNaOH溶液4.0ml。1.3.3总酶活力的测定：取3支干净试管，编号，1号加入1.0ml酶稀释液，将各个试管和淀粉溶液置于40摄氏度恒温水浴中保温10min，加入PH5.6的缓冲溶液1.0ml，0.4MNaOH溶液4.0ml，1％淀粉溶液2.0ml，在40摄氏度恒温水浴中准确保温5min，保温过后加入0.4MNaOH溶