《抗体制药pa》ppt课件

《《抗体制药pa》ppt课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、第五节抗体工程一、1890年Behring发现白喉抗毒素为代表，其特点是用抗原免疫动物来获得多克隆抗体二、以1975年Kohler创建杂交瘤技术制备单克隆抗体为代表。三、以1994年Winter以基因工程方法制备抗体为代表四、1994年Winter创建了噬菌体抗体库技术第五节抗体工程抗体分类多克隆抗体免疫动物单克隆抗体杂交瘤技术基因工程抗体噬菌体抗体库技术第五节抗体工程一、噬菌体抗体库技术的基本方法二、噬菌体抗体库技术的特点三、基因工程抗体的表达第五节抗体工程1.获取目的基因一般都是从提取RNA经反转录PCR获

2、取抗体某一特定基因区段，如重链和轻链可变区（VH、VL）基因。抗体基因的组合形式多为单链抗体。第五节抗体工程2.抗体库技术的载体现在普遍使用的噬菌粒（phagemid）载体，具有噬菌体和质粒的共同特点。抗体蛋白和噬菌体外壳蛋白以融合蛋白的形式表达在载体表面，再感染后，能使目的克隆得以扩增。第五节抗体工程3.淘筛淘筛的基本过程是：抗原固相化后，对噬菌粒群的吸附、洗涤和洗脱后在感染扩增，与辅助噬菌体超感染获得大容量次级文库，在反复与抗原吸附，经几轮淘筛后，淘汰了非目的克隆，是目的克隆大量地扩增。第五节抗体工程4.表

3、达与鉴定目的克隆经过鉴定后，再导入感受态菌株，进行可溶性表达，其产物用Westernblot分析确定后，完成全过程。第五节抗体工程遗传工程鼠人抗体鼠：将小鼠lg基因灭活，然后转入人lg基因，生产出人单抗第五节抗体工程噬菌体抗体库技术将抗体全套可变区间基因组装到噬菌体载体，并表达于噬菌体表面，所得到的多样性噬菌体抗体的集合，称为噬菌体抗体库。利用噬菌体抗体库，筛选并富集特异性抗体的过程，称为噬菌体抗体库技术。第五节抗体工程噬菌体抗体库的分类㈠按抗体基因的性质分1.DNA文库2.cDNA文库㈡按抗体基因的来源分1.

4、天然抗体库（nativeantibodulibrary）2.免疫抗体库3.半合成抗体库4.全合成抗体库第五节抗体工程噬菌体展示技术的原理第五节抗体工程噬菌体展示技术是将各种多肽或蛋白质以融合蛋白的形式表达并展示在噬菌体表面，同时将其遗传密码包含于噬菌体内部，这使得蛋白质的功能与其基因密码有机的连接在一起。第五节抗体工程选择方式：淘选（Panning）而不是筛选（Screening）第五节抗体工程第五节抗体工程第五节抗体工程第五节抗体工程第五节抗体工程第五节抗体工程第五节抗体工程第五节抗体工程第五节抗体工程一、噬

5、菌体抗菌库的构建第五节抗体工程第五节抗体工程第五节抗体工程筛选流程第五节抗体工程第五节抗体工程二、噬菌体抗体库技术的特点基因型和表型相统一选择能力和扩增能力相结合第五节抗体工程噬菌体展示技术最关键的优势有三：第一，淘选的高效率使得在极低的存在水平下，挑选到高亲和力噬菌体成为可能；第二，所挑选到的噬菌体可在微量存在的情况下，通过感染细菌得到富集；第三，展示的多肽或蛋白质与其包含在噬菌体内部的基因密码的连接，使得结合肽或蛋白质的序列分析既快速又简便。第五节抗体工程噬菌体抗体库技术的优势可实现单抗的小型化可实现单抗的

6、多功能化简单易行、生产成本低、筛选容量大、可通过发酵生产、大量制备单克隆抗体噬菌体抗体杂交瘤技术展示技术宿主细胞杂交瘤细菌筛选范围~103107~109时间几个月几周操作繁杂相对简单免疫必须可避免人源抗体—+费用高低生产量有限无限基因获取再克隆直接应用前景有限不可估第五节抗体工程第五节抗体工程三、基因工程呢抗体的表达原核表达大肠杆菌真核细胞表达哺乳动物细胞、昆虫细胞、酵母转基因植物表达转基因动物表达第五节抗体工程抗体在体外人源化存在的问题操作过程复杂需付出昂贵的代价抗体的亲和力降低抗体不是人体免疫系统天然产生异

7、源抗体与免疫系统的配合第五节抗体工程最理想的单克隆抗体100%人源人类免疫系统自然产生第五节抗体工程全人抗体的理论基础癌症、病毒、细菌对机体而言均为异己物人体不断受异己物攻击，但免疫系统同城游清除能力免疫系统通过体液免疫和细胞免疫对异己物做出反应体液免疫就是针对异己物天然地产生抗体第五节抗体工程全人抗体面临的关键问题持续分泌抗体的人B细胞抗体分泌细胞的保持第五节抗体工程25年来的全人抗体的尝试鼠骨髓瘤不适合与人B细胞融合稳定性差抗体产量低非洲淋巴细胞瘤病毒（EBV）保存抗体分泌细胞细胞株不稳定抗体的产量低不能特

8、异性地保存抗体分泌细胞很难获得人类骨髓瘤细胞株第五节抗体工程全人抗体技术的最新突破成功建立人骨髓瘤细胞系，人源抗体进入新的里程用途：能稳定的保持人B细胞分泌抗体的能力发明人：英国剑桥大学的DrKarpas教授意义：1.在整体水平研究人类产生的抗体2.开创人类抗体基因组学的研究评价：1.诺贝尔奖得主DrMilstein推荐发表在PNAS2.世界权威杂志“科学”发表了新闻评述3.剑桥大学开