《抗体制药》PPT课件

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1、第四章抗体制药第一节概述一.抗体工程与抗体药物1890年Behring（培林）和北里柴三郎发现白喉抗毒素,建立了血清疗法,开创了抗体制药。1937年Tiselius（提赛留斯）用电泳法将血清蛋白分离为白蛋白、α、β、γ球蛋白，并证明抗体活性主要存在于γ球蛋白组分。抗体是指能与相应抗原特异性结合具有免疫功能的球蛋白。抗体的产生：机体免疫系统受抗原刺激后，B淋巴细胞被活化增殖和分化为浆细胞，由浆细胞合成和分泌的球蛋白。20世纪60年代发现多发性骨髓瘤是浆细胞癌变形成的恶性增殖性疾病。病人血清中出现同抗体结构类似的球蛋白，统称为免疫球蛋白（immunoglobuli

2、n，Ig）。所以Ig是化学结构的概念，而抗体是生物学功能的概念。抗体与细菌、病毒或毒素等抗原结合，通过下列3种或其中一种方式综合和除去有害物质：1.直接使抗原失去活性2.使免疫效应细胞将其吞噬并加以破坏3.使抗原表面弱化从而易于受补体破坏多克隆抗体：病原微生物含有多种抗原决定簇的抗原物质，因此这些抗体制剂也是多种抗体的混合物，故称多克隆抗体。早期采用的抗体药物主要为多克隆抗体，虽然其在治疗多种急性中毒中仍发挥重要的作用，但是多克隆抗体存在非均一性、异质性、不稳定性等缺点。1975年Kohler（乔治科勒）和Milstein（凯撒米尔斯坦）首先利用B淋巴细胞杂交

3、瘤技术制备出单克隆抗体（monoclonalantibodyMcAb）。单克隆抗体具有高度特异性、均一性、来源稳定、可大量生产等特点，为抗体制备和应用提供了全新的手段，还促进了基础和临床医学的发展。单克隆抗体作为抗体制剂，在临床上主要用与疾病的诊断和治疗。单克隆抗体检测与某些疾病有关的抗原，辅助临床诊断。用放射性核素标记单克隆抗体进行肿瘤显像，做免疫定位诊断。单克隆抗体用于临床治疗，CD3单克隆抗体作为免疫抑制剂对器官移植免疫排斥有抑制作用。以单克隆抗体作为载体的药物对肿瘤进行定向治疗（抗体“导弹”即为靶向制剂）。二、抗体药物的特异性单克隆抗体针对特定的单一抗

4、原表位，具有高度的特异性，这是抗体药物发挥治疗作用的重要基础。对于抗肿瘤抗体药物的研究表明，其特异性主要表现在：1.与相关抗原的特异性结合2.对肿瘤靶细胞的选择性杀伤3.在动物体内呈靶向性分布4.对相关的肿瘤显示更强的疗效三、抗体药物的主要研究方向1.研究新的分子靶点2.免疫检测技术的研发3.抗体的人源化4.抗体药物分子的小型化5.具有抗体功能的融合蛋白第二节单克隆抗体及其制备单克隆抗体是将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的。一、抗原与动物免疫制备特定抗原的单克隆抗体，首先要制备用

5、于免疫的适当抗原，再用抗原进行动物免疫。有的抗原可以用化学合成：地高辛多数抗原物为混合物须经免疫、筛选、克隆化。为使杂交瘤细胞稳定，免疫动物和骨髓瘤细胞供体应为同一品系动物进行免疫。目前常用的骨髓瘤细胞系多来自BALB/c品系小鼠和LOU品系大鼠，因此免疫动物也采用相应的品系。免疫的方法采用体内免疫法和体外免疫法。体内免疫法适用于免疫原性强、抗原量较多时应用，一般用8～12周龄雌性鼠。颗粒性抗原（如细菌细胞抗原）的免疫原性强，可不加佐剂，直接注入腹腔10个细胞进行初次免疫，间隔1～3周，再追加免疫1～2次。7可溶性抗原按每只小鼠10～100μg抗原与弗氏完全佐

6、剂等量混合后注入腹腔内，进行初次免疫，间隔2～4周，再用不加佐剂原抗原追加免疫1～2次。一般再采脾细胞前3日由静脉注射最后一次抗原。刺激B细胞分裂。注：1、弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，能够非常有效的诱导产生高滴度的抗体。弗氏完全佐剂含结核分枝杆菌的细胞壁成分，可以加强对抗原的抗体反应。佐剂活性来自于油滴中免疫原的持续释放，并刺激局部免疫反应。简单的说，这个注射入哺乳动物皮下之后，会产生炎症和疼痛。2、弗氏完全佐剂一般由石蜡油、羊毛脂和灭活的分枝杆菌（卡介苗）组成的。脾内免疫法即在麻醉下直接将0.1～0.2ml抗原注入脾脏进行免疫。一般细胞抗原需105个，

7、可溶性抗原需10μg。体外免疫法用于不能采用体内免疫的情况下，如：制备人源性单克隆抗体；抗原免疫源性极弱，易引起免疫抑制。优点：需抗原量少，免疫期短，干扰因素少。体外免疫法：用4～8周龄BALB/c小鼠的脾脏制成单细胞悬液，再加入适当抗原使其浓度达0.5～5μg/ml,在5%CO37C下培养4～5天,再分离脾细胞,进行细胞融合。o2o二、细胞融合与杂交瘤细胞的选择性培养1.骨髓瘤细胞的选择应尽可能选择自身不合成或至少不分泌任何免疫球蛋白分子或片段的骨髓瘤细胞作为亲本细胞。细胞必须处于良好的生长状态，对数生长期最好。2.免疫脾细胞悬液的制备取经免疫的小鼠，摘除眼

8、球放血，将小鼠处死，无菌摘取脾脏，研磨