紫杉醇对人树突状细胞生物活性影响

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1、紫杉醇对人树突状细胞生物活性影响［摘要］目的探讨常用化疗药物紫杉醇（TAX）对人树突状细胞（DC）生物活性的影响及作用机制，为化疗联合生物免疫治疗抗肿瘤提供理论基础。方法体外实验：分别在紫杉醇5ng/mL（b组）、10ng/mL（c组）、20ng/mL（d组）、40ng/mL（e组）的浓度下及不加紫杉醇的条件下（a组）培养DC细胞，检测各组DC细胞的存活率、细胞成熟标志物及细胞因子分泌量，探究紫杉醇对人树突状细胞生物活性的影响，同时通过乳酸脱氢酶释放法（LDH）测定与紫杉醇处理的树突细胞共培养的细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对肺癌A549细胞株的杀伤作用，测

2、定紫杉醇对树突细胞抗原呈递作用的影响。体内实验：采用人肺癌细胞株A549的肿瘤组织块，皮下接种于裸鼠腋下，建立裸鼠肺癌模型。2d后将30只裸鼠随机分成5组，分别为A组（对照组）:细胞株A549+盐水（NS）；B组:细胞株A549+DC+CIK；C组:细胞株A549+CIK+TAX；D组：细胞株A549+TAX；E组：细胞株A549+TAX+DC+CIK。每3天检测1次肿瘤大小、裸鼠存活时间。结果体外实验：在共培养6d的前提下，b、c组第6天存活率与第0天存活率比较，差异无统计学意义（P>0.05）,d、e组第6天存活率与第0天存活率比较，差异有高度统计学意义（

3、P0.05）betweenthecellsurvivalratesingroupbandgroupcontheday6andthatonday0afterco~cuItured6days・Therewassignificantstatisticaldifference(P[Keywords]Paclitaxel；Humandendriticcells；Biologicalactivity；Lungcancer恶性肿瘤在我国居民疾病致死原因中位列第三，其中肺癌的致死率逐年上升。最近的研究数据显示，肺癌已经超过胃癌，成为所有癌症中每年致死人数最多的肿瘤[1]。目前

4、肿瘤主要的治疗方法为外科手术切除，化疗、放疗。但肿瘤患者经过手术、常规化疗、放疗达到临床治愈后，体内仍残留肿瘤细胞，停止治疗后，残留的肿瘤细胞又开始增殖，经若干时间后会达到109个细胞，出现临床复发，这是治疗失败的主要原因之一。生物免疫治疗作为新的治疗方法最近得到了广泛的关注，其具有靶向杀伤、特异性高、不良反应小以及可以杀伤对化疗耐药的肿瘤细胞等优势[2-3]o目前在国内、外得到广泛应用的免疫细胞治疗是树突状细胞(dendritecell,DC)和细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokineinducedkillercells,CIK)两种细胞联合治疗肿瘤，但传统

5、治疗理念认为化疗药物可以杀死免疫细胞，所以生物免疫治疗经常在化疗间歇期进行，笔者查阅了一些国外的文献，认为只要掌握好化疗药物的剂量，在化疗期间也可应用免疫细胞治疗，本实验通过体外和体内两种途径，探究化疗药物紫杉醇对免疫细胞DC、CIK生物活性的影响和对抑制肿瘤能力的调控，为化疗期间同时应用免疫细胞治疗提供基础理论依据。1材料与方法1.1材料1.1.1肿瘤细胞株肺癌A549细胞株来源于中国医科大学肿瘤研究所，由辽宁省人民医院生物治疗中心实验室体外传代培养。1.1.2药品及试剂基因重组人IL-2（北京双鹭药业股份有限公司）、抗-CD3单抗（CD3McAb）、淋巴细

6、胞分离液（FicollPaquePlus公司）、TritonX-100（德国Applichem公司）、基因重组人IFN-Y（上海凯茂生物医药有限公司）、白细胞介素T（IL-1）、RPMIMedium1640培养基（美国GIBC0）、胎牛血清（美国GIBCO）、PBS缓冲液、紫杉醇注射液、酶联免疫检测仪、全自动血细胞分析仪、24及96孔板、复方枸椽酸钠保存液、流式细胞检测抗体anti-CD86-FITC、anti-CD40-PE、anti-MHCII-PE、anti-ILT2-PE均来自BD公司。LDHELISA试剂盒。1.1.3实验动物30只SPF级BALB/

7、C裸鼠，购于北京华阜康科技股份有限公司，（许可证号:SCXK（京）2009-004）,由沈阳中海生物技术开发有限公司动物中心饲养，雌性，鼠龄6〜8周，体重18〜22go1.2方法1.2.1冻融法制备肺癌A549细胞抗原消化收集对数生长期的A549细胞，用PBS液离心洗涤两次，再用PBS液重悬为1X1010个/L,封装入冻存管。置-8（TC冰箱冷冻10min,重复3次，然后，以10000r/min离心30min,取上清液-20°C保存备用。1.2.2DC细胞诱导、扩增机采健康人外周血35mL,用Ficoll密度梯度离心，分离单个核细胞。用PBS洗涤2次并计数。离

8、心并将细胞重悬浮于RPMI1640培养