人羊膜匀浆上清液治疗兔角膜碱烧伤的病理研究

《人羊膜匀浆上清液治疗兔角膜碱烧伤的病理研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、人羊膜匀浆上清液治疗兔角膜碱烧伤的病理研究【摘要】目的:观察人羊膜匀浆上清液促进兔角膜碱烧伤后角膜上皮和基质修复的作用，为临床上应用人羊膜匀浆上清液点眼治疗眼碱烧伤提供理论依据｡方法:将制备的羊膜匀浆上清液点眼治疗兔角膜碱烧伤，并对治疗后的角膜照相观察角膜上皮愈合和基质修复情况｡结果:羊膜匀浆上清液治疗角膜碱烧伤后眼充血明显减轻，角膜上皮愈合较快，角膜上皮细胞排列整齐,基质屮炎症细胞浸润减轻凡胶原纤维排列整齐｡结论:早期应用羊膜匀浆上清液能促进兔角膜碱烧伤后角

2、膜的愈合及膜基质有序修复｡【关键词】羊膜匀浆上清液;角膜;碱烧伤文献报道羊膜上皮细胞分泌EGF､TGF・a､KGF､HGF､bFGF等生长I大I子[1,2],我们直接将羊膜制成匀浆，观察其存在的多种细胞因子是否对角膜上皮细胞的增殖有促进作用，并将羊膜匀浆上清液制成眼液点眼治疗兔角膜碱烧伤，然后行角膜病理研究，观察其对角膜上皮愈合､炎症反应､基质修复的影响,以期寻找一种比羊膜移植经济､方便&#

3、65380;效果住的治疗角膜碱烧伤的新方法｡1资料和方法1.1动物及主要试剂:⑴家兔:体重1.5〜2.0kg｡⑵羊膜匀浆上清液:口制，方法如下:在超净台上将羊膜在PBS液中清洗3次，约10〜15分钟，取适当大小称湿重，按1：1加PBS液放入匀浆机中,每分钟5000转,10冲程磨制匀浆，每冲程30秒｡取出匀浆按1：5加PBS液于离心管中离心2000r/min,10分钟,取上清液备用(1小时内用)｡后加入细胞冻存液放入・80°C冰箱过夜，再放入液氮中

4、冻存｡(3)bFGF(贝复舒眼液);(4)1mol/LNaOH:口制｡1.2碱烧伤动物模型的制备:(1)1%T卡因眼液点眼3次｡(2)乙酉迷吸入麻醉｡(3)开睑器开睑,将浸在1mol/LNaOH的直径为8mm的滤纸片置于兔角膜中央30秒｡(4)生理盐水冲洗结膜囊3分钟｡1.3动物分组和点眼:取15只家兔(30只眼)分为3组:对照组､羊膜匀浆组､bFGF组｡碱烧伤后立即开始点眼，

5、羊膜匀浆组(1:2羊膜匀浆上清液加氯霉素眼液点眼)､bFGF组(贝复舒眼液加氯霉素眼液点眼)､对照组(生理盐水加氯霉索眼液点眼)｡每天每眼点眼3次，羊膜匀浆液每天从液氮中取出新鲜配制｡1.4角膜取材送检:术后第一天､第三天､第七天和第十四天分别每组取材行光镜病理检查｡1.5统计学处理:所冇数据均用均数土标准差（x土s）表示，采用SPSS10.0软件包行方弟分析｡2结果2.1HE染色:碱烧伤后

6、第一天､第三天见bFGF组和对照组白细胞均明显多于羊膜匀浆组，第七天吋各组角膜上皮均已基本愈合,羊膜匀浆组和bFGF组见角膜上皮细胞排列整齐，而对照组角膜上皮细胞排列紊乱｡2.2VG染色:碱烧伤后第一天､第三天各组胶原纤维均较少，笫七天和第I•四天吋,羊膜匀浆组和bFGF组胶原纤维较多，排列较规则，而对照组排列相对紊乱｡2.3AgNOS染色成纤维细胞计数:对染色切片行成纤维细胞计数（每张切片随机选3个视野,xl000）,每组3张切片，取其平均数行

7、统计学处理，见表1｡表1AgNOS染色成纤维细胞计数（个/视野丘占）组別第七天第十四天对照组4.77±1.7110.44±2.83羊炭匀浆组9・88±3・35・13.50±3.46bFGF组10・1±2.52“ll.88t3.48注:•与对照组比较,P<0.05严与对照组比较.P<0.0l3讨论眼角结膜碱烧伤是临床上严重而难治的眼表疾病之一,预后常常较差｡近年来羊膜移植治疗角膜碱烧伤在临床上已得到广大眼科医师的青睐ʍ力;但是对于羊膜移植后的转归，多数学者认为它是一种

8、暂吋性的生物覆盖物,在移植后1〜2周,羊膜口行溶解､脱落，或较长久贴附于角膜表面，沉积于前弹力层为轻度雾状混浊，持续3个月Z久,但移植后的羊膜长期存在并成为受体组织组成部分尚缺乏直接证据｡在羊膜移植中羊膜的主要作用是给角膜上皮愈合提供健康基底膜作用｡但是进一步研究表明，羊膜自身可表达EGF､TGF-?琢､KGF､HGF､bFGF､TGF■卩1&