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《萝卜硫素对大鼠局灶性脑缺血·再灌注损伤神经元保护机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、萝卜硫素对大鼠局灶性脑缺血•再灌注损伤神经元保护机制【摘要】目的研究萝卜硫素(SFN)对大鼠局部脑缺血-再灌注损伤的神经保护机制。方法24只雄性SD大鼠,随机(随机数字法)分为3组，A组：假手术组(n=8),B组：缺血-再灌注模型组(n=8),C组：萝卜硫素干预组(n=8)；A组：假手术后腹腔注射等量磷酸盐缓冲液(PBS),B组：缺血-再灌注术后腹腔注射等量PBS,C组：缺血-再灌注术后腹腔注射萝卜硫5mg/kgo通过四氮哇红(2,3,5-Triphenyltetrazoliumchloride,
2、TTC)染色测定脑梗死体积，苏木精伊红染色法(HE)观察组织学形态改变，TUNEL法检测脑神经元凋亡变化，RT-PCR测定缺血脑组织核转录因子kappaB亚单位p65(NF-kBp65)^诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达，免疫蛋白印记法(Western-bloting)检测脑组织iNOS、NF-kBp蛋白表达水平。结果与B组比，C组脑梗死体积降低[(96.34±3.72)vs.(124.65±3.85),P[Keywords]Sulforaphen；Ischemia/reperfusi
3、on；Injury；Neuronal；Apoptosis；TUNEL；NF-kB；iNOS研究发现在脑缺血时，通过激活核因子kappaB(nuclearfactor-kappaB,NF-kB）上调诱导型一氧化氮合酶（inducednitricoxidesynthase,iNOS）表达，促使一氧化氮（NO）的产生，导致神经细胞损伤［1］。因此寻找一个有效药物来抑制炎症介质的释放和延缓脑缺血-再灌注损伤时神经元细胞的凋亡具有重要意义。萝卜硫素（sulforaphen,SFN）是一种由葡萄糖莱腹子昔经黑
4、芥子硫酸昔酶酶解或酸水解后产生的异硫代毓酸盐衍生物，研究表明SFN能够诱导抗氧化酶的产生，从而发挥抗炎症、抗氧化和去毒性的作用［2］。但有关SFN与缺血性卒中疾病对神经元细胞凋亡的研究，少有报道。本实验通过制作缺血-再灌注大鼠模型，研究SFN对缺血-再灌注脑组织NF-KBp65、iNOS表达和神经元细胞凋亡的影响，探讨SFN对脑神经保护作用。1材料与方法1.1材料萝卜硫素（美国LKTLaboratorieS公司），TTC染色剂（美国Sigma公司）,iNOS（美国Cayman公司）,NF-kBp6
5、5抗体，羊抗鼠3-actin（SantaCruz公司），山羊抗鼠的二抗试剂（江苏碧云天试剂公司），Trizol试剂盒（美国Gibco-BRL公司），NF-kBp.iNOS、P-actin引物（上海生工生物技术公司）,Imagepro-plus6软件（Imaging公司）,其他试剂均来自国产，所有检测均于温州医科大学附属第二医院科研中心实验平台完成。1.2方法1.2.1实验动物及分组24只SPF级雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，6〜8周龄，体质量（200±10）g,由温州医科大学动物实
6、验中心提供，随机（随机数字法）分为3组，A组：假手术组（n=8）,B组：缺血-再灌注模型组（n=8）,C组：萝卜硫素干预组（n=8）；温度251左右饲养。1.2.2模型复制①B组：参照何斌等［3］以及Zacharek等［4］制作缺血-再灌注模型改良模型。®A组：其余操作同B组，不插入线栓线。③C组：操作同B组，参考文献［5］萝卜硫素最佳用药剂量（5mg/kg）干预。为避免低温对脑组织缺血-再灌注产生的影响，各组大鼠术后用烤灯照射，保持直肠温度37°C左右，至大鼠清醒。1.2.3脑标本制备含3个方面
7、。1.2.3.1模型组SD大鼠麻醉后，颈部正中切开皮肤，游离出左侧颈总、颈内、颈外动脉，于近心端结扎颈外、颈总动脉后，夹闭颈内动脉。将线拴插入颈总动脉，2h后拉出拴线实现再灌注，再灌注24h后，每组随机（随机数字法）抽取4只大鼠，麻醉后开胸，将导管经左心室插入主动脉，生理盐水快速冲洗、灌注，并固定2h,断头取脑，视交叉前后行冠状切片，置于4%甲醛固定，以石蜡固定、HE染色观察脑组织学变化。另4只大鼠，再灌注干预24h后断头取脑，分成5等分冠状脑片置于2%TTC溶液中，观察脑组织颜色。取左侧半球脑组
8、织，并保存于-70I冰箱中备用（左侧缺血组织），以便检测各项指标。Imagepro-plus6.0软件图像进行分析处理，计算脑梗死体积百分比。考虑脑水肿的影响，矫正梗死体积百分比（％）=（矫正梗死体积/左侧脑体积）X100%⑹。1.2.3.2动物模型标准①疼痛刺激后右侧肢体反应迟钝或甚至消失；②提尾悬拉后右上肢蜷缩屈曲；③向右侧转圈或跌倒；④出现右侧霍纳（Horner）综合征：右侧眼裂变小。1.2.3.3TUNEL法检测脑缺血-再灌注区神经元凋亡变化常规脱蜡至水，切片加入蛋白酶复合
