人类白细胞抗原,血小板抗原检测技术

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1、人类白细胞抗原检测技术，血小板抗原检测技术输血科朱伯平人类白细胞抗原HLA(humanleukocyteantigen），(人类白细胞抗原)系统是目前所知人体最复杂的多态系统。自1958年发现(JeanDausset)第一个HLA抗原，到20世纪70年代，HLA便成为免疫、遗传学、免疫生物学和生物化学等学科的一个重要新兴研究领域。HLA功能生物学功能：器官和骨髓移植前供、受者组织相容性配型其他方面：亲子鉴定以及人类遗传学方面首个艾滋病治愈病例出现移植骨髓后获抗体2011年06月03日,对于医生胡特而言，病人蒂莫西·雷·布

2、朗就像漆黑抗艾研究道路上的一道亮光。这名被冠以“柏林病人”的特殊病患同时兼有白血病和艾滋病。在医学界看来，布朗已经是即将踏入坟墓的人，然而在接受骨髓移植后，布朗竟然奇迹般得以重生。这一事件震惊了整个医学界，医生们从他的身上看到了医学界的奇迹：终结艾滋。人类白细胞抗原(HLA)HLA抗原分布相当广泛，见于所有的有核细胞上，但在淋巴细胞上的密度最高血小板上的HLA抗原是血小板膜表面的固有结构成分，主要是HLA-I类的A、B位点的抗原HLA-I类抗原是引起血小板同种免疫和血小板输注无效的主要抗原，约占80%HLA抗原检测技术人

3、类白细胞抗原检测技术已广泛应用于器官移植前的组织配型检测方法：血清学方法、细胞学方法和基因分型方法与临床输血的关系—HLA抗原可引起免疫应答→HLA抗体→发热性非溶血性输血反应和血小板输注无效HLA血清学方法血清学方法：是用一系列已知的抗HLA抗原的标准血清来检测未知淋巴细胞表面的HLA抗原型别。微量淋巴毒实验原理：淋巴细胞膜表面具有HLA抗原，而分型血清中含有抗特定HLA抗原的细胞毒抗体，该抗体与淋巴细胞膜上的相应的HLA抗原结合后在补体的参与下损伤细胞膜，经染料染色后，通过观察细胞是否被染色来判断待测细胞是否损伤或死

4、亡，进而判断抗原、抗体反应的强度。微量淋巴细胞毒试验记分死细胞（%）记分意义0～101阴性11～202可疑阴性反应21～404可疑阳性反应41～806阳性反应0～＞808强阳性反应抗血清的来源和标准①通过妊娠、输血和同种器官移植等免疫作用产生HLA同种抗体②使用纯化的HLA抗原免疫动物，可产生HLA异种抗体③使用杂交瘤技术，可获得单克隆抗体④少数存在的天然抗体质量标准1.血清特异性程度（FP《3%，FN《14%）2.血清的强度，采用强度指数SI表示，SI》70%HLA细胞学方法①纯合细胞分型方法②预致敏淋巴细胞试验③混合

5、淋巴细胞培养纯合细胞分型方法该方法的原理为带有A/A纯合抗原的细胞（HTC）作为刺激细胞，带有未知抗原X/X的检测细胞作为应答细胞，在两种细胞组成的单向混合淋巴细胞培养反应（MLC）中，如果发生刺激反应，表明受检细胞能够识别A抗原当成外来抗原，所以受检细胞不具有A抗原，反之受检细胞可能是A抗原的杂合子或纯合子预致敏淋巴细胞试验在应答细胞A与刺激细胞B的初次混合淋巴细胞培养反应(MLC)中，经过9-12天培养，应答细胞A增生为淋巴细胞后变成小淋巴细胞，即为预致敏淋巴细胞（PL）混合淋巴细胞培养两个无关个体的淋巴细胞，在体外

6、适当的环境下混合培养后可以互相激发，使细胞活化并向母细胞转化，产生分裂增生现象，即为混合淋巴细胞培养方法（MLC）。现MLC主要用于实体器官移植前的快速相容性检测。分双向MLC和单向MLCHLA基因分型方法PCR限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）序列特异性引物PCR（PCR-SSP）PCR序列特异性寡核苷酸探针分型技术（PCR-SSO）PCR单核苷酸序列分析（PCR-SBT）基因芯片流式细胞术粒细胞抗原、抗体检测血清学方法①粒细胞凝集试验（GAT）②粒细胞免疫莹光试验（GIFT）③单克隆抗体特异性粒细胞抗原捕获试验

7、（MAIGA）④ELISA方法⑤流式细胞术基因分型技术主要方法为PCR-RFLPPCR-SSPPCR-SSO等1、PCR序列特异性引物2、PCR限制性片段长度多态性血小板血型抗原血小板血型抗原主要有两大类：血小板相关抗原血小板特异性抗原。血小板相关抗原：血小板表面存在的与其他细胞或组织共有的抗原血小板特异性抗原（HPA）：通常将血小板表面由血小板特有的抗原决定簇组成，表现出血小板特有的遗传多态性，并且不存在于其他细胞和组织上的抗原。血小板相关抗原1、红细胞血型抗原：血小板上的ABH抗原物质，包括机体所产生的以及由血浆中黏

8、附在血小板表面的两类抗原构成。2、HLA系统血型抗原：血小板表面主要存在HLA-Ⅰ类抗原，如HLA-A、HLA-B、HLA-C位点等血小板特异性抗原血小板特异性抗原(HPA)是由血小板特有的抗原决定簇组成，表现出血小板独特的遗传多态性，不存在于其它细胞和组织中，目前已发现的血小板特异性抗原已有8个系统16个抗原国际命