血小板 抗原抗体检测.ppt

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1、血小板抗原抗体广州医科大学附属第五医院输血科目录血小板相关疾病血小板抗原血小板抗体抗体检测及交叉配血血小板抗原血小板抗原泛指存在于血小板膜的能够刺激机体产生抗体,并能与之结合的血小板膜蛋白质和糖分子.血小板相关抗原:红细胞血型抗原:ABO、Lewis和P系统抗原等,无RH抗原白细胞抗原:HLA抗原血小板特异性抗原(humanplateletantigen,HPA)血小板抗原血型抗原:ABO、Lewis和P系统抗原等,无RH抗原来源:血小板表面的A、B抗原来源主要有两个:大部分是血小板本身所固有(从巨核细胞分化而来);小部分是从血浆吸附而来。如体外将O型血小板和A或B型血清温育,血小板就会带

2、上A或B抗原。不同个体间血小板膜ABH抗原量存在差异;同一个体的每一个血小板抗原量差别非常大,由此可以解释有些人输入ABH不相容血液后,一部分输入的血小板迅速被破坏,而另外的血小板其生命力不受影响.血小板抗原白细胞抗原:HLA抗原血小板存具有HLA-Ⅰ类抗原类抗原,主要是HLA-A和HLA-B位点的抗原(少量表达的HLA-C抗原)。HLA-Ⅰ类分子为血小板的固有蛋白,少量从血浆中吸附。血小板HLA抗原的免疫原性比白细胞弱。血小板抗原血小板特异性抗原(humanplateletantigen,HPA)主要位于人血小板膜的一大类抗原,称之为血小板特异性抗原高频率抗原以“a”表示,低频率抗原以“

3、b”表示人血小板同种抗原(HPA)自1959年被发现以来,迄今已经检出24个抗原,其中HPA-1,-2,-3,-4,-5,-6,-15被血小板命名委员会(PNC)列入抗原系统,包含14个对偶抗原,而HPA-7-14,-16,-17因为对偶抗原未检出而未达到系统命名标准。血小板抗原血小板抗原血小板抗原24个抗原主要分布在糖蛋白GPⅡb,GPⅢa,GPⅠb,GPⅠa以及CD109上;GPⅢa(CD61)携带9种HPA抗原,分别为HPA-1,HPA-4,HPA-6bw,HPA-7bw,HPA-8bw,HPA-10bw,HPA-11bw,HPA-14bw,HPA-16bwGPⅡb(CD41)是跨膜

4、蛋白,细胞外116kD的重链,通过二硫键与22kD的轻链共价结合。GPⅡb上携带HPA-3和HPA-9bw;血小板抗体抗体分类疾病HLA/HPA抗体其它抗体同种抗体格兰茨曼血小板功能不全病抗GPⅡb/Ⅲa抗体同种异体抗体新生儿同种异体免疫性血小板减少症HPA1b(78%),HPA5b(19%)HPA-2,3,4(3%),HPA-15,HPA-9bw,Anti-CD36血小板输注无效症HLA-I抗体50~80%17~25%(日本人为HPA-2b),HPA-15,anti-CD36极少数为ABO抗体血小板输血后紫癜HPA-1a,HPA-1b,HPA-2b,HPA-3a,HPA-3b,HPA-1

5、5,anti-CD36少数为抗GPIa/IIa抗体被动同种异体免疫性血小板减少症HPA-1a,HPA-5b移植相关同种异体免疫性血小板减少症HPA-1a,HPA-3,HPA-5b自身抗体自发性血小板减少症多数位于GPⅡb/ⅢaGPIb/IX/V,少数位于GPIV/V和GPIa/IIa继发于母体自发性血小板减少症同上药物依赖性抗体奎宁/奎尼丁抗体所致疾病抗原位于GPⅡb/Ⅲa和GPIb/IX肝素抗体所致疾病抗原表位是PF4抗体检测及交叉配血采取预防和治疗措施避免流产、出血等血小板相容性检测抗原定型抗体检测建立血小板供者库筛选基因型相容的供者避免血小板抗体的产生诊断血小板免疫性疾病交叉配型筛查

6、血小板相容性供者减少血小板输注无效避免紫癜、出血和死亡血小板抗原定型血清学定型即用已知特异性抗体检测血小板血型抗原缺点:特异性抗体来源困难---人血清中血小板抗体通常为多特异性---单克隆抗体匮乏,目前国际上仅有HPA-1a单抗,无其它HPA单抗。基因定型限制性片段长度多态性分析(RFLP)序列特异性寡核苷酸聚合酶链反应(PCR-SSO)序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)HPA-1HPA-2HPA-3HPA-4HPA-5HPA-15abababababab阳性对照条带等位基因条带1bb2ab3bb4aa5aa15aa血小板抗体检测血清学ELISA法(酶联免疫试验)血小板抗原单抗特

7、异性固相化法(MAIPA)固相血小板免疫血清学试验(SPISA)简易致敏红细胞血小板血清学试验(SEPSA)流式细胞仪改良抗原俘获(ELISA)免疫荧光试验简易致敏红细胞血小板血清学试验SEPSA血小板谱细胞(三人份O型混合血小板)反应板(已包被血小板单抗)血小板单层阳性反应阴性反应患者血清/血浆抗人IgG指示红细胞(人IgG致敏红细胞)50g,5min离心洗涤3次50μl/孔洗涤5次水浴30min阳性阴性50μl/孔各

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